[发明专利]一种有效的免疫印迹的PVDF膜标记方法、一抗孵育方法及洗脱、显色方法

权利要求书

1.一种PVDF膜的标记方法，其特征在于：它是手持无墨中性笔隔着不透水薄膜对PVDF膜进行书写标记。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述不透水薄膜是PE薄膜。

3.一种一抗孵育方法，其特征在于：它是在将PVDF膜和一抗溶液共同置于BD管中，再将BD管置于Crystal试管旋转混匀器，保持试管旋转12-16h，期间的环境温度为4℃。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述环境温度为4℃孵育12-16h。

5.一种免疫印迹的洗脱方法，其特征在于：该方法包括：保持PVDF膜的样品面朝上，浸泡于TBS/TBST缓冲液中，摇床摇晃洗脱。

6.一种免疫印迹的显色方法，其特征在于：该方法包括：PVDF膜经显色液孵育后，保持PVDF膜的样品面朝上，进行显色曝光。

7.一种免疫印迹方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)电泳：蛋白样品进行SDS-PAGE凝胶电泳；

2)标记：用权利要求1或2所述方法对PVDF膜标记；

3)转膜：将电泳凝胶与PVDF膜贴合，两边均堆叠滤纸和海绵，在缓冲液中加电压进行转膜；

4)转膜后标记：用权利要求1或2所述方法对PVDF膜标记；

5)洗脱：用权利要求5所述方法将PVDF膜浸泡于TBS中进行洗脱；

6)封闭：用封闭液对膜进行封闭；

7)洗脱：用权利要求5所述方法将PVDF膜浸泡于TBST中进行洗脱；

8)一抗孵育：用权利要求3或4任一所述方法进行孵育；

9)洗脱：用权利要求5所述方法将PVDF膜浸泡于TBST中进行洗脱；

10)二抗孵育：摇床上用二抗在室温下孵育；

11)洗脱：用权利要求5所述方法将PVDF膜浸泡于TBST中进行洗脱；

12)显色：用权利要求6所述方法将PVDF膜进行曝光显色。