[发明专利]一种提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法

权利要求书

1.一种提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于,包括以下步骤：

1)在无菌条件下,将抽取的脂肪组织混合液置入试管内，在离心机内离心处理15min，离心机转速为1200rpm，使得全血样本初步分离,离心后血液加入抗凝剂,静置30-60分钟，将油脂层弃去,吸取最上层的上清血浆,加入羟乙基淀粉溶液充分混匀；

2)将步骤1)所得的样本加入核酸型发酵液内，得到样本发酵液，加入生理盐水搅拌,搅拌后静置，用无菌注射器抽取发酵液上清,并在发酵液上清中加入冻存液，使发酵液上清与冻存液混匀后,加入冻存容器，使用半导体制冷设备冷冻，半导体制冷设备温度降低速率为10-12℃/min；

3)将上一步骤冷冻的发酵液取出并消化成黏糊状，用冰冻离心机进行离心作业,经生理盐水水浴，生理盐水浓度为5％，在发酵液重新液化后，静置处理,并将静置后的液体加入离心管，将离心管放在离心机内进行二次离心处理，离心机转速保持1200rpm；

4)离心完成后,在离心管内加入生理盐水，在恒温环境下静置处理，恒温温度为22-24℃,用滤网过滤后，放入冰冻离心机进行离心作业，弃掉离心管上层的血浆，加入新的血浆样本，使得沉淀的血小板重新悬浮，即得到活性因子。

2.如权利要求1所述的提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于：步骤1)中，所述抗凝剂与全血样本比例为1:10-12，所述抗凝剂采用乙二胺四乙酸、草酸钠、肝素与枸橼酸钠混合制成。

3.如权利要求1所述的提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于：步骤2)中，所述冻存液为小牛血清与DMSO混合物。

4.如权利要求3所述的提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于：所述小牛血清与DMSO比例为1:8。

5.如权利要求1所述的提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于：步骤4)中,在离心管内所加入的生理盐水浓度为6％，用70μm滤网过滤后，放入冰冻离心机以1200r/min，离心6min。

6.如权利要求1所述的提高自体脂肪活细胞等移植性自体脂肪成活率的活性因子的萃取方法，其特征在于：步骤4)之后，将所得到的活性因子接种于培养皿内，置于36℃，5％CO2培养箱内孵育，隔日换液，之后每日观察，每3-4天换液一次。