[发明专利]一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法

说明书

本发明涉及一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：抽取移植用脂肪颗粒,将获得的脂肪颗粒放入离心管中离心后，将上层的油脂回收备用，中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，得到破碎脂肪；将第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中；将油脂加入到脂肪组织中，混匀过滤，将滤液装入第四注射器内，保持注射器内负压，离心后，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质；本发明操作过程简便、成本低廉，且制得的脂肪移植材料相比原有脂肪体积大大浓缩。

[技术领域]

本发明属于脂肪移植技术领域，具体地说是一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法。

[背景技术]

由于外伤、感染、肿瘤切除或先天性缺陷原因等造成的体表组织器官凹陷畸形，除了影响容貌之外，还会不同程度的影响患者的心理健康及社会交际活动。自体脂肪移植填充是目前治疗体表软组织凹陷或轮廓不对称的主要方法之一。其主要缺点是移植后容易吸收，吸收率占20％～90％不等，大多需要接受反复数次注射才能达到较为满意的效果。

脂肪干细胞和基质血管片段细胞在干细胞治疗领域的应用越发广泛，尤其是SVF的应用已在众多国家展开临床试验，其在提高脂肪移植后保存率以及创面修复方面优势明显：脂肪组织新鲜分离得到的SVFs中含有大量的、具有生物学活性的自体ASCs；来源于自身脂肪组织，无免疫排斥反应；人体内储量丰富；无需体外培养，降低细菌污染的风险。

然而现有技术在获取脂肪移植材料的过程较为复杂，成本较高，对于脂肪移植材料的提取不能达到很好的效果，尤其是不能够去除成熟的脂肪细胞及油脂。因此，若能提供一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质，将具有非常重要的意义。

[发明内容]

本发明的目的就是要解决上述的不足而提供一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，不仅操作过程简便、成本低廉，而且制得的脂肪移植材料相比原有脂肪体积大大浓缩，为脂肪移植填充提供了良好的材料。

为实现上述目的设计一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤:1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1000-1200g/min速度离心4-5min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为10-20ml/s，如此连续往返推注2-3min；5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡30-40s后，将震荡后的混合物以2500-2800g/min的速度离心6-8min；6)离心后，混合液分为上、中、下三层，上层为油脂层，下层为肿胀液层，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。

进一步地，步骤5)中，所述过滤为40-80目数筛网过滤，且筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。

进一步地，步骤6)中，收取中间层产物后，加入等体积的生理盐水混匀，于6000-8000rpm条件下离心5～10min，弃去离心沉淀，收集上层产物，即为富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。

进一步地，步骤6)离心后，若混合液不分层或分层不明显，则重复步骤4)至步骤5)。

本发明还提供了一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质，该脂肪移植材料由上述制备方法制备得到。