[发明专利]一种神经干细胞的取材培养方法

说明书

本发明公开了一种神经干细胞的取材培养方法，包括以下步骤：a.选取合格的人工流产胚胎组织；b.无菌条件下分离胚胎组织：分离胚胎组织，再找到并分离外胚层形成的神经板或者神经管；c.获得符合接种浓度的单细胞悬液：无菌条件下取出室管膜层组织并缓冲液清洗后，再用机械分离或酶消化分离法分离神经管上皮细胞，以1×10⁵个/毫升的密度接种于含有促有丝分裂诱导因子的DMEM/F12无血清培养基中；d.传代培养；e.倒置显微镜观察细胞生长情况。本发明在取材的组织上创新，增加了原材取材的便捷性，更有效的选取了更具有活性的原始细胞进行培养，提高了神经干细胞的培养成功率，为各类神经干细胞的临床、基础研究提供了可靠保证。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种神经干细胞的取材培养方法。

背景技术

干细胞研究是当前生命科学研究的热点，神经干细胞则是目前研究最多、应用最多的干细胞种类之一。自从神经组织不可以再生的论断被打破后，神经干细胞进入了广大科研工作者的视野，许多的临床医生也做了很多尝试。一些相关的理论也渐渐被大家熟知：90年代中期的许多研究表明人类新生的神经元、胶质细胞来自于神经干细胞，它们大多集中在嗅球、侧脑室的脑室区脑室下区、海马、脊髓，他们在体内可以分化为神经元和角质细胞，体外培养则可以生成神经球。而这些神经球的许多性状已经被证实可以加以利用，在许多疾病的细胞移植中起作用，这也使得许多的神经科医生围绕着他开展了丰富多样的临床实验。

伴随着神经干细胞基础理论的进展，临床实验已经如火如荼的开展，许多医院已经在诸如脑出血后遗症、脑梗塞后遗症、视神经损伤、持续植物状态、癫痫、脑瘫、脊髓损伤、脑胶质瘤等方面取得了很大的进展。这些缺乏特效治疗手段而又严重危害人类健康的疾病，许多年来一直的困扰也许在不久的将来借助神经干细胞的力量会给患者带来福音。在取得成绩的同时也应该看到，在这一领域内依然存在着这样那样、林林总总的问题，比如细胞来源稀少，病历数量有限，远期疗效无法预见，没有大规模的科学的临床对照实验，没有统一的规章指南等等，但是毫无疑问神经干细胞已经提供了一个更加革命化的细胞武器。以往的神经干细胞实验，取材往往是大月份引产的完整胎儿，在一切检查合格后，通过解剖中枢神经系统的相应的功能区域（比如脑室区、脑室下区、海马、齿状回等），进行原代取材后通过细胞原代培养的方法获得。当然也有利用其它来源的干细胞如骨髓、脐带、羊水等经过诱导后使其跨胚层分化为神经细胞，但是实验操作复杂。现在可以直接利用的合格的引产胎儿越来越少，甚至科研人员不得不耗费大量的时间精力去解决这个问题，病人不得不在整个治疗过程中用等待来占据大多数住院时间。随着医疗制度的不断完善，随着人民医疗保健常识的提高，将来的大月份引产胎儿将会越来越少，所以，解决这个问题迫在眉睫。

发明内容

本发明为了解决上述的技术问题，而提供一种神经干细胞的取材培养方法。

本发明是按照以下技术方案实现的：

一种神经干细胞的取材培养方法，包括以下步骤：

a. 选取合格的人工流产胚胎组织

选择年龄20-35岁的妇女，妊娠 2周以上、8周以内，经常规手术前检查无禁忌症；经负压吸引出的胚胎组织离体不超过4小时，柔软、粉红的绒毛组织和类纽扣形的胚胎组织完好；

b. 无菌条件下分离胚胎组织

在无菌条件下剥除血管、筋膜组织，冲洗去血液，分离胚胎组织，再找到并分离外胚层形成的神经板或者神经管；

c. 获得符合接种浓度的单细胞悬液