[发明专利]两个定点敲除水稻OsMAP65-3.1基因的sgRNA的oligo DNA组在审
| 申请号： | 202010745749.4 | 申请日： | 2020-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN111793626A | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 徐杰;林小丽;贺浩华;姜志树;范寒雨;刘嘉龙;马莹莹;朱昌兰;边建民;傅军如;彭小松;贺晓鹏 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/113;C12N15/82;C12Q1/6895;C12Q1/686;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 深圳市鼎浩知识产权代理有限公司 44544 | 代理人： | 张炬杰 |
| 地址： | 330000 江*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 两个 定点 水稻 osmap65 3.1 基因 sgrna oligo dna | ||
1.两个定点敲除水稻OsMAP65-3.1基因的sgRNA的oligo DNA组，其特征在于：该OsMAP65-3.1基因的两个sgRNA的靶位点，其DNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，一个oligo DNA组为OsMAP65-3.1-1-F1和OsMAP65-3.1-1-R1，另一个oligo DNA组为OsMAP65-3.1-2-F1和OsMAP65-3.1-2-R1，OsMAP65-3.1-1-F1核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，OsMAP65-3.1-1-R1核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，OsMAP65-3.1-2-F1核苷酸序列如SEQID NO.5所示，OsMAP65-3.1-2-R1核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.如权利要求1所述的两个定点敲除水稻OsMAP65-3.1基因的sgRNA的oligo DNA组在水稻OsMAP65-3.1基因编辑育种中的应用。
3.一种定点敲除水稻OsMAP65-3.1基因的sgRNA的载体，其特征在于，该载体为pUbi-Cas9-OsMAP65-3.1-1和pUbi-Cas9-OsMAP65-3.1-2，分别通过将oligo DNA组OsMAP65-3.1-1-F1和OsMAP65-3.1-1-R1混合、OsMAP65-3.1-2-F1和OsMAP65-3.1-2-R1混合退火形成双链，再与线化的PENTR4进行连接，通过Gateway重组构建得到含有水稻OsMAP65-3.1基因靶序列的质粒pUbi-Cas9-OsMAP65-3.1-1和pUbi-Cas9-OsMAP65-3.1-2，OsMAP65-3.1-1-F1核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，OsMAP65-3.1-1-R1核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，OsMAP65-3.1-2-F1核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，OsMAP65-3.1-2-R1核苷酸序列如SEQID NO.6所示。
4.一种鉴定OsMAP65-3.1基因的sgRNA靶区域编辑情况的引物组，其特征在于：包括两个引物对，其中一个引物对的DNA序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，另一个引物对的DNA序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
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