[发明专利]一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基质金属蛋白酶‑3测定试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1以质量分数计包括如下组分：缓冲液100mmol/L～200mmol/L，防腐剂0.1％～0.2％，无机盐1％～10％，络合剂0.2g/L～0.8g/L，硫脲0.1％～1％，表面活性剂0.2％～1.5％，pH 6.5～7.5；其中，所述表面活性剂为胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠中的至少一种。该试剂盒准确度高，偏差在10％以内；灵敏度可以达到5ng/mL；精密度高，试剂盒精密度CV值为1.688％～2.257％。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase)，基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca²⁺、Zn²⁺等金属离子作为辅助因子而得名。其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成：(1)疏水信号肽序列；(2)前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活；(3)催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要；(4)富含脯氨酸的铰链区；(5)羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。

将MMPs分为6类，为胶原酶、明胶酶、基质降解素、基质溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。基质金属蛋白酶3是基质金属蛋白酶家族的重要成员，MMP-3主要由巨噬细胞、滑膜细胞、成纤维细胞和软骨细胞所分泌，是一种具有广泛作用底物的蛋白酶，它的活性可导致纤维连接素、软骨连接蛋白以及多种胶原酶(包括Ⅳ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅺ)等蛋白(酶)的分解，被认为是讲解关节软骨最为关键的蛋白酶，它参与组织形态发生、损伤修复、炎症反应等一系列生理、病理过程，并在风湿性关节炎、动脉粥样硬化、乳腺癌等疾病和肿瘤的发生及进展中发挥重要作用。

MMP-3也叫间充质溶解素。多种细胞在被适当的刺激后，都可以表达MMP-3，如成纤维细胞、软骨细胞、内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞、造骨细胞、角质化细胞等等。炎症因子如IL-1、肿瘤坏死因子、表皮生长因子、血小板源生长因子、佛波醇等等都是诱导试剂。而视黄酸、糖皮质激素、雌激素、黄体酮与TGF-β都抑制MMP-3的表达。MMP-3又称基质分解素-1，是金属蛋白酶类的主要成员之一，MMP-3在细胞内以前体形式(proMMP23)合成，共含有477个氨基酸，分子量约57kDa。

MMP-3的测定通常采用ELISA方法进行测定，但是ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，不同批次试剂检测结果差异较大，准确度、灵敏度不高。

因此，如何开发一种准确度、灵敏度高的基质金属蛋白酶-3测定试剂盒，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒，提高试剂的灵敏度，同时具有良好的准确度、线性和精密度性能。

为了实现上述目的，本发明提供了一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1以质量分数计包括如下组分：

缓冲液100mmol/L～200mmol/L，防腐剂0.1％～0.2％，无机盐1％～10％，络合剂0.2g/L～0.8g/L，硫脲0.1％～1％，表面活性剂0.2％～1.5％，pH 6.5～7.5；其中，所述表面活性剂为胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠中的至少一种。

进一步地，所述缓冲液为Good’s缓冲液、Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种。