[发明专利]一种同时分析利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链的色谱方法

说明书

本发明公开了一种同时分析利拉鲁肽及其Boc‑利拉鲁肽主链的色谱方法，具体地，将含有利拉鲁肽及Boc‑利拉鲁肽主链的样品溶液注入高效液相色谱仪，并采用如下高效液相色谱条件进行检测：键合硅胶色谱柱；流动相A为0.05mol/mL‑0.15mol/mL磷酸二氢铵水溶液，流动相B为乙腈；其中，流动相B体积占比为15％→95％进行梯度洗脱。该分析方法具有分析速度快、准确、简便、快捷，对于利拉鲁肽生产过程中的质量控制、分析纯化都能发挥良好的作用，且专属性好、灵敏度高、成本低等特点。

技术领域

本发明属于医药技术领域，属于质量标准的建立和检测方法开发，涉及一种同时分析利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链的色谱方法。

背景技术

糖尿病是一种高发病，全球性的发病都在不断升高，据全球卫生组织公布数据显示：2000年发病人数为1.75亿，2010年发病人数为2.39亿，预计2025年将突破3亿,到2035年发病人数将接近6亿，全球糖尿病发病率正在迅速增长，中国糖尿病人数占据世界的1/4，患病率已高达11.6％，位居世界首位。糖尿病涉及人体各个生命系统，严重影响人们的劳动生活，并威胁人类的生命安全。

利拉鲁肽是一种与肠道细胞分泌的肠促胰岛素激素肽类似物，具有高度同源性，因而几乎具备内源物所拥有的全部生理功能，可以用于治疗糖尿病及其对心血管并发症，是一种由丹麦诺和诺德公司开发的一个长效胰高血糖素样肽-1类似物,作为新一代以肠促胰岛素为基础的降血糖药物，可安全有效降糖并可能对多种心血管危害因素起保护作用。利拉鲁肽注射剂经皮下注射给药，每日注射一次，提供24h的血糖控制，其药代动力学特性不受性别或年龄影响，利拉鲁肽绝对是2型糖尿病治疗领域革命性药物。与二甲双胍或磺脲类药物相比具有很好的疗效，而且副作用小，不产生免疫反应等优点，利拉鲁肽的序列为H2N-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH，在26位的Lys上连有一个棕榈酸和一个谷氨酸。市场上对于利拉鲁肽的需求量大,合成方法较多。基因工程的方法技术难度大，易产生副产物以及其他杂质，但来源稳定，产率大，生物活性高，所以采用发酵的方式生产，然后对产物进行结构修饰是比较好的选择，从而对利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链的检测方法也提出更高的要求。

在得到利拉鲁肽的过程中，Boc-利拉鲁肽主链是重要中间产物，对其含量检测和控制是必不可少的过程，Boc-利拉鲁肽主链其序列为H2N-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH，在26位的Lys上有一个BocHN-保护基团，为下一步结构修饰做好准备，所以有必要对现有技术中的利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链建立分析方法，以解决上述问题。

发明内容

本发明针对以上技术上的需要，公开了一种同时分析利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链的色谱方法，目的在于提供一种稳定性好、重现性好、灵敏度高、操作简单、准确快速，用于利拉鲁肽质量控制方法。

本发明提供了一种同时分析利拉鲁肽及其Boc-利拉鲁肽主链的RP-HPLC色谱方法，其特征在于，将含有利拉鲁肽及Boc-利拉鲁肽主链的样品溶液注入高效液相色谱仪，并采用如下高效液相色谱条件进行检测；

键合硅胶色谱柱；

流动相：流动相A为0.05mol/mL-0.15mol/mL磷酸二氢铵水溶液，

流动相B为乙腈；

其中，流动相B体积占比为15％→95％进行梯度洗脱。

在另一优选例中，流动相A为0.1mol/mL磷酸二氢铵水溶液。