[发明专利]一种新的FJ染色方法和装置

说明书

本发明涉及生物染色技术领域，提供了一种新的FJ染色方法和装置。其中所需实验染色溶液配制包括0.1％Acetic acid配制、0.06％高锰酸钾配制、FJ储存液、80％乙醇配制的1％NaOH、70％乙醇、0.0001％FJ‑C配制和PBS溶液配置，其中，PBS溶液配置包括精确称量8g NaCl、3.63g Na2HPO4·12H2O、0.2g KCl以及0.24g KH2PO4，将其溶于900ml d2H2O中并定容至1000ml得到所述PBS溶液。本发明能够有效的改善脑片在常规染色过程中容易发生的褶皱问题。

【技术领域】

本发明涉及生物染色技术领域，特别是涉及一种新的FJ染色方法和装置。

【背景技术】

Fluoro-Jade C(FJ)是一种染料，对退化的神经元细胞有很高的亲和力和对比度，因此可特异性染色所有退化神经元。同时，它既适合于定位已经退化的神经元细胞而且不易褪色，适合几乎所有的染色方法和组织学处理。动物缺血后，缺血处的神经元发生变形，可以被FJ染色。

然而现有的常规染色方法，容易产生如图1所示被染色对象的翻折、堆叠现象(也被描述为脱片的现象)，这是因为在染色液浸泡过程中，因为外界因素造成的需要移动染色盘、染料与被染色目标对象的化学物理作用等等原因造成了被染色目标对象发生类似图1所示的结果，尤其以图1中左下角虚线框所标注的两个样本个体发生的翻折问题最为严重，这种情况会严重影响后续合格染色样本的生成，以及正常的实验过程进行。

一种现有技术中的染色过程包括：

1、配置实验所需溶液。

2、贴片：冰冻切片25um或30um贴片于载玻片(已过明胶)上。

3、晾片：室温晾片过夜，充分干燥，防止后续操作脱片。

4、漂洗：充分干燥后，70％乙醇浸洗2分钟，再次晾干过夜。

5、漂洗：蒸馏水浸洗2分钟，再次晾干过夜。

6、孵育：0.06高锰酸钾中反应10分钟。

7、漂洗：蒸馏水浸洗2分钟，风干。

8、染色：FJ工作液浸染20分钟，避光。

9、漂洗：蒸馏水浸洗3次1分钟。

10、晾片：50℃，干燥10分钟。

11、透明：二甲苯透明2次10分钟。

12、封片：DPX封片剂进行封片。

相应操作之后可能存在问题的效果图如图1和图2所示。

鉴于此，克服该现有技术所存在的缺陷是本技术领域亟待解决的问题。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题在染色过程中，脑片容易形成如图2所示的褶皱现象，影响后续的实验观察过程。进一步的，容易在设置载玻片过程中产生如图1所示被染色对象的翻折、堆叠现象，也被描述为脱片的现象。

第一方面，本发明提供了一种新的FJ染色方法，所需实验染色溶液配制包括0.1％Acetic acid配制、0.06％高锰酸钾配制、FJ储存液、80％乙醇配制的1％NaOH、70％乙醇、0.0001％FJ-C配制和PBS溶液配置，其中，PBS溶液配置包括精确称量8g NaCl、3.63gNa2HPO4·12H2O、0.2g KCl以及0.24g KH2PO4，将其溶于900mld2H2O中并定容至1000ml得到所述PBS溶液，染色方法过程包括：

先滴加5ml的80％乙醇配制的1％NaOH于多孔板中，再将缺血脑片放置于80％乙醇配制的1％NaOH中孵育3-6分钟；其中，每一孔用于容纳一待染色的脑片；