[发明专利]一种基于磁珠法的普适于多种样本快速提取基因组DNA的方法

说明书

本发明公开了一种基于磁珠法的普适于多种样本快速提取基因组DNA的方法，具体适用于口腔拭子样本、唾液样本和血液样本。本发明提供了一种提取基因组DNA的方法，依次包括如下步骤：(1)加入20μl ProteinaseK溶液、350μl样本液和300μl CWL，85℃反应12min后反应3min；(2)加310μl磁珠异丙醇混合物，反应7min后磁吸60s；(3)收集磁珠，加750μl KL，反应2min后磁吸30s；(4)收集磁珠，加750μl CW1，反应2min后磁吸30s；(5)收集磁珠，加750μl GW2，反应2min后磁吸30s，风干2min；(6)收集磁珠，加80μl EB，65℃反应7min后磁吸60s，收集溶液。本发明可应用于定量PCR、二代测序和芯片检测等下游实验。

技术领域

本发明属于生物技术领域，提供了一种基于磁珠法的普适于多种样本快速提取基因组DNA的方法，具体适用于拭子样本、唾液样本和血液样本。

背景技术

现有方法提取口腔拭子DNA时，前处理剧烈震荡过程中，会产生大量的棉絮脱落物阻碍DNA结合硅基包被的磁珠表面，从而降低DNA的得率、完整性。

现有混合拭子(保存液+棉签)提取的前处理耗时长，无法大规模地快速提取不同样本类型(唾液、血液等)的DNA，且部分棉絮脱落还会导致一些杂质被Buffer EB或去离子水洗脱，DNA不能满足后续实验要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于磁珠法的普适于多种样本快速提取基因组DNA的方法，具体适用于拭子样本、唾液样本和血液样本。

本发明提供了一种提取基因组DNA的方法，依次包括如下步骤：

(1)加入20μl ProteinaseK溶液、350μl样本液和300μl Buffer CWL，85℃、3000rpm振荡反应12min，然后3000rpm振荡反应3min；

(2)完成步骤(1)后，加入310μl磁珠异丙醇混合物，3000rpm振荡反应7min，然后磁吸60s；

(3)完成步骤(2)后，收集磁珠，加入750μl Buffer KL，3000rpm振荡反应2min，然后磁吸30s；

(4)完成步骤(3)后，收集磁珠，加入750μl Buffer CW1，3000rpm振荡反应2min，然后磁吸30s；

(5)完成步骤(4)后，收集磁珠，加入750μl Buffer GW2，3000rpm振荡反应2min，然后磁吸30s，然后风干2min；

(6)完成步骤(5)后，收集磁珠，加入80μl Buffer EB，65℃、3000rpm振荡反应7min，然后磁吸60s，收集溶液，即为含基因组DNA的溶液。

ProteinaseK溶液的制备方法为：向25mg Proteinase K干粉中加入1.25mlProteinase K Storage Buffer使其完全溶解。

Proteinase K干粉和Proteinase K Storage Buffer为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒(货号为CW2533S)中的组分。

磁珠异丙醇混合物的制备方法为：向装有Magbeads PN的试剂瓶中加入33ml异丙醇，混匀。

装有Magbeads PN的试剂瓶为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒(货号为CW2533S)中的组分。异丙醇为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒(货号为CW2533S)中的组分。