[发明专利]一种基于磁珠法的普适于多种样本快速提取基因组DNA的方法在审
申请号: | 202010715683.4 | 申请日: | 2020-07-23 |
公开(公告)号: | CN111778240A | 公开(公告)日: | 2020-10-16 |
发明(设计)人: | 马玉昆;冉函;刘艳;贾寒;张晓伟;孙琼琳;韩仕伟;李峰峰 | 申请(专利权)人: | 北京果壳生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 何叶喧 |
地址: | 102206 北京市昌平区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 磁珠法 适于 多种 样本 快速 提取 基因组 dna 方法 | ||
1.一种提取基因组DNA的方法,依次包括如下步骤:
(1)加入20μlProteinaseK溶液、350μl样本液和300μlBuffer CWL,85℃、3000rpm振荡反应12min,然后3000rpm振荡反应3min;
(2)完成步骤(1)后,加入310μl磁珠异丙醇混合物,3000rpm振荡反应7min,然后磁吸60s;
(3)完成步骤(2)后,收集磁珠,加入750μl Buffer KL,3000rpm振荡反应2min,然后磁吸30s;
(4)完成步骤(3)后,收集磁珠,加入750μl Buffer CW1,3000rpm振荡反应2min,然后磁吸30s;
(5)完成步骤(4)后,收集磁珠,加入750μl Buffer GW2,3000rpm振荡反应2min,然后磁吸30s,然后风干2min;
(6)完成步骤(5)后,收集磁珠,加入80μl Buffer EB,65℃、3000rpm振荡反应7min,然后磁吸60s,收集溶液,即为含基因组DNA的溶液。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:ProteinaseK溶液的制备方法为:向25mgProteinase K干粉中加入1.25ml Proteinase K Storage Buffer使其完全溶解。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于:Proteinase K干粉和Proteinase K StorageBuffer为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒中的组分。
4.如权利要求1或2或3所述的方法,其特征在于:磁珠异丙醇混合物的制备方法为:向装有Magbeads PN的试剂瓶中加入33ml异丙醇,混匀。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于:装有Magbeads PN的试剂瓶为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒中的组分。
6.如权利要求1至5中任一所述的方法,其特征在于:Buffer KL、Buffer CW1和BufferGW2均为江苏康为世纪生物科技有限公司的血液DNA提取试剂盒中的组分。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法,其特征在于:Buffer CWL为康为世纪生物科技有限公司的口腔拭子DNA提取试剂盒中的组分。
8.如权利要求1至7中任一所述的方法,其特征在于:所述样本液为口腔拭子样本液;所述样本液的制备方法为:取采样后的口腔拭子DNA样本保存管,弃除拭子头,12000rpm离心5min,弃除部分上清液,保留底部500μl,震荡混匀,即为样本液。
9.如权利要求1至7中任一所述的方法,其特征在于:所述样本液为唾液样本液或血液样本液。
10.如权利要求1至9中任一所述的方法,其特征在于:所述提取基因组DNA采用96通道全自动核酸提取仪CWE9600。
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