[发明专利]新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体及制备方法

说明书

本发明公开了新型冠状病毒SARS‑CoV‑2主蛋白酶与紫草素复合物晶体及制备方法，包括如下步骤：制备M‑pro蛋白；生成M‑pro蛋白晶体；把M‑pro蛋白晶体与紫草素按比例混合；采用气相扩散法中的悬滴法进行结晶，得到M‑pro蛋白与紫草素复合物晶体。本发明优点有：获得新型冠状病毒SARS‑CoV‑2主蛋白酶M‑pro蛋白与中药活性成分紫草素复合物晶体，有助于了解M‑pro蛋白与紫草素相互作用的分子机理，阐明体内M‑pro蛋白与紫草素的结合位点，揭示中药治疗新冠病毒的新型分子机制，为中药进入临床提供理论依据。便于通过开发出特效口服中药制剂形式及利用现代药物化学手段进行改造，从而为新型冠状病毒的一线防控治疗提供有疗效的方剂。

技术领域

本发明涉及蛋白质结晶技术领域，尤其涉及新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与中药活性成分复合物结晶技术。

背景技术

全球新型冠状病毒SARS-CoV-2(新冠病毒)感染疫情发展凶猛，国内外大型药企和科研机构都相继投入到SARS-CoV-2的治疗药物和疫苗开发中。研究表明RNA聚合酶抑制剂瑞德西韦(Remdesivir)、洛匹那韦/利托那韦、阿比朵儿/达芦那韦、磷酸氯喹、干扰素等在体外细胞水平和体内均表现出对SARS-CoV-2的抑制作用，但是，这些药物都不是针对新型冠状病毒靶点的靶向药物。

在这场新型冠状病毒防治疫情的战争中，中药成分在治疗该病毒引起的新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)当中起着至关重要的作用。由于中药的安全性和预防中的独特作用，现已有大量确有疗效的方剂应用于临床治疗中，能够缩短患者的病程和降低重症的发生率。因此，靶向新冠病毒靶点的中药成分的研究和理解中药活性成分如何抑制新冠病毒的分子机制显得尤为重要。

M-pro蛋白是新型冠状病毒产生的主要的蛋白酶，冠状病毒大多数功能蛋白(非结构蛋白)由ORF1ab基因编码，先翻译成一个多蛋白体(7096aa)，再由M-pro蛋白切割成多个有活性的蛋白，抑制M-pro蛋白能够有效抑制病毒的感染与复制。因此，M-pro蛋白是治疗SARS-CoV-2药物的最重要、最有潜力的靶点之一。

通过解析M-pro蛋白与中药成分的复合结构，有利于我们更好的理解其作用机制，为基于结构的靶向药物设计提供基础研究。

发明内容

本发明的目的在于提供新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体及制备方法，以解决现有技术中基于结构的靶向药物设计缺乏研究基础的问题。

为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：

新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体，是M-pro蛋白与紫草素复合物晶体。

一种新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，

包括如下步骤：

(1)制备M-pro蛋白；

(2)生成M-pro蛋白晶体；

(3)把M-pro蛋白晶体与紫草素按比例混合；采用气相扩散法中的悬滴法进行结晶，得到M-pro蛋白与紫草素复合物晶体。

进一步地，所述M-pro蛋白的浓度是10mg/mL以上。

进一步地，所述步骤(2)是使用气相扩散法中的座滴法获得蛋白质的结晶，先在48孔蛋白结晶板中的池液孔中加入80μl池液1，然后用晶体枪分别吸取1μl蛋白质点到左边点样孔中，2μl蛋白质点到右边点样孔中，再用枪吸取1μl池液1分别滴在左右两个点样孔上，最后用胶布密封；置于20℃，3天后成功获得M-pro蛋白晶体。