[发明专利]新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体及制备方法

权利要求书

1.新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体，其特征在于：

是M-pro蛋白与紫草素复合物晶体。

2.一种如权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)制备M-pro蛋白；

(2)生成M-pro蛋白晶体；

(3)把M-pro蛋白晶体与紫草素按比例混合；采用气相扩散法中的悬滴法进行结晶，得到M-pro蛋白与紫草素复合物晶体。

3.根据权利要求2所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述M-pro蛋白的浓度是10mg/mL以上。

4.根据权利要求2所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述步骤(2)是使用气相扩散法中的座滴法获得蛋白质的结晶，先在48孔蛋白结晶板中的池液孔中加入80μl池液1，然后用晶体枪分别吸取1μl蛋白质点到左边点样孔中，2μl蛋白质点到右边点样孔中，再用枪吸取1μl池液1分别滴在左右两个点样孔上，最后用胶布密封；置于20℃，3天后成功获得M-pro蛋白晶体。

5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述步骤(3)是采用气相扩散法中的悬滴法进行混合物的结晶，在24孔蛋白结晶板中的池液孔加入500μl池液2，先用晶体枪吸取3μl池液2点到在盖玻片上，然后滴上浓度为2mM紫草素化合物0.3μl，得到含有池液2和紫草素的混合物，M-pro蛋白晶体放入含有池液2和紫草素的混合物中，将含有M-pro蛋白晶体和紫草素与池液2混合物的盖玻片反盖到边缘涂有真空脂的盛有500μl池液2的容器上，轻轻压紧，使液滴与容器内的池液2能够在同一个密闭的空间内，结晶温度为20℃，40h后成功获得复合物晶体。

6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述池液1和池液2均是0.1M HEPES pH7.5，质量分数为20％PEG10000的混合物。

7.根据权利要求2所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述步骤(1)的M-pro蛋白的获得步骤包括：构建M-pro蛋白表达质粒；将M-pro蛋白表达质粒转化，诱导培养表达M-pro蛋白；纯化M-pro蛋白。

8.根据权利要求7所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2主蛋白酶与紫草素复合物晶体的制备方法，其特征在于：

所述诱导培养表达M-pro蛋白的过程：取100μL培养菌液到100mL含有50μg/ml Kan⁺抗生素的LB液体培养基中，在37℃，200rpm的摇床上培养过夜；将全部过夜菌液加到1000mL含有50μg/ml Kan⁺抗生素的LB液体培养基中，在37℃，200rpm的摇床上培养直至OD₆₀₀为0.6-0.8之间。加入IPTG，使终浓度为0.67mmol，30℃，200rpm，诱导5小时。