[发明专利]重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法及其GST蛋白标准品

说明书

本发明公开了重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法及其GST蛋白标准品，本发明用不同浓度的GST标准品和MntC蛋白原液包被酶标板，检测MntC蛋白原液中GST的含量，是以GST标准品溶液吸光度值对其相应的浓度拟合出标准曲线，将HI蛋白原液吸光度值代入标准曲线计算出MntC蛋白原液中的GST含量，再计算出MntC蛋白原液中的GST残留量。所述检测方法灵敏度高，能特异性的测出重组金黄色葡萄球菌疫苗HI蛋白原液中的GST含量。

技术领域

本发明涉及生物技术制药领域，具体涉及重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法及其GST蛋白标准品。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种革兰阳性菌，广泛分布于自然界，存在人和动物的体表、鼻咽、会阴部及肠道，通常引发皮肤软组织感染、菌血症以及转移并发症，如肺炎、心内膜炎、脓毒性关节炎和骨髓炎。1961年英国首次报道分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)以来，目前MRSA已成为全球医院内感染率最高的病原菌之一，与乙型肝炎、AIDS并称为当今世界3大感染性疾病。MRSA对绝大多数抗生素产生多重耐药，目前万古霉素是治疗MRSA的最后一道防线。随着抗生素的滥用，金黄色葡萄球菌的耐药性也在不断发生变化，美国分别于2002和2004年报道分离出耐万古霉素金葡菌(VRSA)，使得MRSA可能将面临无抗生素可治的严峻挑战。因此，研发能有效预防MRSA感染和耐药性发展的新型MRSA疫苗具有重要意义。而首先研发出具有自主知识产权的、高效、安全、经济的MRSA疫苗对控制MRSA感染、耐药性发展、生物恐怖防御和提高国际竞争力具有重要意义。

目前，我国自主研发的重组金黄色葡萄球菌疫苗为多组分重组蛋白疫苗，于2019年进入了II期临床试验阶段。由于在产业化放大生产重组金黄色葡萄球菌疫苗需要严格把控疫苗质量，保证疫苗的安全性，合格性和有效性，而MntC蛋白是该疫苗的成分之一，然而在生产MntC蛋白原液过程中，首先需要通过初级纯化获得的是GST-MntC融合蛋白，再经过PreScission protease酶切和精细纯化后才能获得MntC蛋白原液，因此最后获得的MntC蛋白原液中可能残留GST蛋白。为了保证获得的MntC蛋白原液所有质检项目合格，我们需要对纯化后MntC蛋白原液进行GST残留量检测。而目前市场上现有的试剂盒中没有针对重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液GST残留量检测的试剂盒，因此发明和研究重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法；本发明的目的之二在于提供检测重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量的GST蛋白标准品；本发明的目的之三在于提供所述的GST蛋白标准品在制备检测重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量的试剂盒中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，分别以梯度稀释的GST蛋白溶液和重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液为包被酶标板，洗涤后用牛血清白蛋白溶液封闭，加入GST鼠抗体与封闭好的酶标板反应，再用HRP标记的山羊抗鼠抗体与酶标板反应，加入TMB显色液显色并终止反应，接着在波长450nm处测定吸光度，根据梯度稀释的GST蛋白溶液的吸光度绘制标准曲线，最后以重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液的吸光度数值在标准曲线上得到重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量。

优选的，所述梯度稀释的GST蛋白溶液浓度分别为1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、15.625ng/ml、7.8125ng/ml。