[发明专利]重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法及其GST蛋白标准品

权利要求书

1.重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：分别以梯度稀释的GST蛋白溶液和重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液为包被酶标板，洗涤后用牛血清白蛋白溶液封闭，加入GST鼠抗体与封闭好的酶标板反应，再用HRP标记的山羊抗鼠抗体与酶标板反应，加入TMB显色液显色并终止反应，接着在波长450nm处测定吸光度，根据梯度稀释的GST蛋白溶液的吸光度绘制标准曲线，最后以重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液的吸光度数值在标准曲线上得到重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量。

2.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述梯度稀释的GST蛋白溶液浓度分别为1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、15.625ng/ml、7.8125ng/ml。

3.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液浓度为250μg/ml。

4.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述封闭为将质量分数为1％牛血清白蛋白溶液以200μl/孔加至酶标板内封闭酶标板，37℃放置2小时。

5.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述GST鼠抗体浓度为400ng/ml；所述HRP标记的山羊抗鼠抗体浓度为80ng/ml。

6.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述TMB显色液为可溶性单组份TMB底物溶液。

7.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述标准曲线为y＝0.0021x-0.0260，相关系数为R²＝0.9853。

8.根据权利要求1所述重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量检测方法，其特征在于：所述GST蛋白溶液由以下方法制备，将含有pGEX-6P-2的XL-1blue菌液活化后，加入IPTG在30℃下诱导表达，然后收集菌体超声破碎，离心收集上清用GlutathioneSepharose 4B填料柱子进行亲和层析，再用谷胱甘肽溶液进行洗脱，接着进行G25脱盐柱脱盐，获得的GST蛋白保存于磷酸盐缓冲液中，获得GST蛋白溶液。

9.检测重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量的GST蛋白标准品，其特征在于：所述蛋白由如下步骤制备：将含有pGEX-6P-2的XL-1blue菌液活化后，加入IPTG在30℃下诱导表达，然后收集菌体超声破碎，离心收集上清用Glutathione Sepharose 4B填料柱子进行亲和层析，再用谷胱甘肽溶液进行洗脱，接着进行G25脱盐柱脱盐，获得的GST蛋白保存于磷酸盐缓冲液中。

10.权利要求9所述的GST蛋白标准品在制备检测重组金黄色葡萄球菌疫苗MntC蛋白原液中GST残留量的试剂盒中的应用。