[发明专利]一种颗粒细胞去除液及其制备方法

说明书

本发明属于人类辅助生殖技术领域，涉及人卵母细胞的颗粒细胞去除液，采用适量EDTA和牛磺酸溶解于含颗粒细胞去除酶的基础盐溶液中配制而成。所述的EDTA含量为0.005‑0.015mM/L。所述的牛磺酸含量为0.05‑0.15mM/L。所述的颗粒细胞去除酶为透明质酸酶，其含量为50‑90IU/mL。所述的基础盐溶液，其组分含量为：氯化钠90.08～101.5mM/L、氯化钾4.41～5.50mM/L、二水氯化钙0.50～2.20mM/L、磷酸二氢钾0.30～0.44mM/L和无水硫酸镁0.15～2.00mM/L，碳酸氢钠3.50～14.50mM/L，4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)10.5‑21.5mM/L，硫酸庆大霉素0.01～0.05g/L，葡萄糖0.50～2.88mM/L，乳酸钠10.5～21.50mM/L，人血白蛋白5～10g/L。

技术领域

本发明属于人类辅助生殖技术领域，涉及人卵母细胞的颗粒细胞去除液，以及其制备方法。

技术背景

在进行单精子胞浆内注射或卵子冷冻前需准备卵母细胞，主要是用特殊的颗粒细胞消化酶去除卵母细胞周围的颗粒细胞。颗粒细胞去除液是在缓冲盐溶液中加入透明质酸酶而成，用于卵子周围颗粒细胞消化的辅助生殖用液。现有的颗粒细胞去除液产品的基础液为简单盐溶液，缺少抗氧化及金属离子螯合剂。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种含抗氧化剂和螯合剂的颗粒细胞去除液，在保证有效消化松解卵子颗粒细胞的同时，加大对敏感的卵母细胞的保护作用。

针对以上问题，本发明提出的技术方案是：

提供一种颗粒细胞去除液，采用适量EDTA(乙二胺四乙酸)和牛磺酸溶解于含颗粒细胞去除酶的基础盐溶液中配制而成。

去除液中采用EDTA作为螯合剂，EDTA可以提供2个氮原子和4个羧基氧原子，与重金属离子配合形成稳定常数极高的蛰金属螯合物，从而降低了重金属对胚胎的不利影响。

此外，牛磺酸是含硫(巯基)氨基酸半胱氨酸的衍生物，牛磺酸是少数已知的天然磺酸之一，其可以调节颗粒细胞的凋亡，在代谢活动中起作用，牛磺酸作为氧自由基清除剂，在去除液中起抗氧化作用。

本发明技术方案的颗粒细胞去除液相对现有现技术，不仅有效去除松解卵子周围颗粒细胞，也通过添加抗氧化组分和螯合剂以减少体外环境中对卵子操作的不利影响，从而尽可能地降低对卵子的损伤。

进一步地，所述的EDTA，其含量为0.005-0.015mM/L。

所述的牛磺酸，其含量为0.05-0.15mM/L。

更进一步地，所述的颗粒细胞去除酶为透明质酸酶，其含量为50-90IU/mL。

再进一步地，所述的基础盐溶液，其配方为：氯化钠90.08～101.5mM/L、氯化钾4.41～5.50mM/L、二水氯化钙0.50～2.20mM/L、磷酸二氢钾0.30～0.44mM/L和无水硫酸镁0.15～2.00mM/L，碳酸氢钠3.50～14.50mM/L，4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)10.5-21.5mM/L，硫酸庆大霉素0.01～0.05g/L，葡萄糖0.50～2.88mM/L，乳酸钠10.5～21.50mM/L，人血白蛋白5～10g/L。

本发明的另一个技术方案是提供所述的颗粒细胞去除液在人类辅助生殖过程中卵子颗粒细胞去除中的应用。

本发明的再一个技术方案是提供一种制备颗粒细胞去除液的方法，将螯合剂EDTA和抗氧化剂牛磺酸溶解于含透明质酸酶的基础盐溶液中配制而成。

进一步地，所述方法包括以下步骤：

a、按各组分称量所有固体组分并分开放置；

b、按先固体后液体，将除硫酸庆大霉素、透明质酸酶和人血白蛋白外的所有组分加入并溶解于超纯水中；