[发明专利]淫羊藿多糖用于制备山羊精液冷冻保存稀释液的应用

说明书

本发明提供了淫羊藿多糖用于制备山羊精液冷冻保存稀释液的应用。本发明利用淫羊藿多糖作为山羊精液的冷冻保存剂有效成分，能够在山羊精液冷冻保存过程中很好地保护精子的生理活性，包括一步稀释法和两步稀释法。尤其是，相对于现有山羊精液冷冻普遍采用两步稀释法的情况，本发明的含有淫羊藿多糖的冷冻保存剂配合一步稀释法冷冻程序即可达到冷冻保存的要求。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及淫羊藿多糖用于山羊精液冷冻保存稀释液及一步稀释法冷冻程序的应用。

背景技术

现有山羊精液的冷冻保存技术中，相较于一步稀释法，两步稀释法的效果较为理想，但两步稀释法的程序相对复杂。

发明内容

结合现有技术的缺陷或不足，本发明提供了淫羊藿多糖用于制备山羊精液冷冻保存稀释液的应用。

进一步，本发明提供了一种山羊精液冷冻保存稀释液。为此，本发明提供的冷冻保存稀释液包括Tris、柠檬酸、果糖、淫羊藿多糖、抗生素和卵黄。

进一步，所述的冷冻保存稀释液中含有甘油。

可选的，所述抗生素选自青霉素和链霉素中的一种或两种的任意比例组合。

可选的，所述山羊精液冷冻保存稀释液配方为：Tris 200～300mM，柠檬酸80～90mM，果糖65～75mM，卵黄15％～25％(V/V)，淫羊藿多糖1～4mg/mL，青霉素2000IU/mL，链霉素0.4g/mL，超纯水100mL。

进一步，山羊精液冷冻保存稀释液配方中含有甘油4％～6％(V/V)。

可选的，所述淫羊藿多糖浓度为2.5～3.5mg/mL。

同时，本发明提供了一种山羊精液冷冻保存方法。为此，所提供的方法包括：山羊精液与上述包含甘油的冷冻保存稀释液等温混合稀释；接着将混合稀释液逐步降温至3～5℃，在3～5℃条件下平衡后冷冻保存。

可选的，所述混合稀释采用多步稀释法，所述多步稀释法包括经一步或多步中间浓度稀释至最终浓度。

另一种山羊精液冷冻保存方法包括：山羊精液与上述不含甘油的冷冻保存稀释液等温混合稀释，接着将混合稀释液逐步降温至3～5℃，在3～5℃条件下平衡后，将平衡后的混合稀释液与上述含甘油的冷冻保存稀释液等温混合稀释，继续在3～5℃条件下平衡后冷冻保存。

本发明采用淫羊藿多糖作为山羊精子的冷冻保存剂有效成分，能够在山羊精液冷冻保存过程中很好地保护精子的生理活性，包括一步稀释法和两步稀释法。

尤其是，相对于现有山羊精子冷冻普遍采用两步稀释法的情况，本发明的含有淫羊藿多糖的冷冻保存稀释液配合一步稀释法冷冻程序即可达到冷冻保存的要求。

附图说明

图1为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后活率的影响；

图2SYBR-14/PI双染色法，A：活精子荧光图；B：死精子荧光图；C：精子质膜完整率荧光图；

图3为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后头部质膜完整率的影响；

图4为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后尾部质膜完整率的影响；

图5为实施例1山羊精子冻后顶体完整率的检测，A：精子顶体染色荧光图；B：精子核染色荧光图；C：Merge图；

图6为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后顶体完整率的影响；

图7为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后总抗氧化能力(T-AOC)的影响；

图8为实施例1淫羊藿多糖对山羊精子冻后丙二醛(MDA)含量的影响；