[发明专利]一种抗人CD47的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了抗人CD47的单克隆抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域如SEQ ID NO.1‑3所示，其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域如SEQ ID NO.5‑7所示。本发明还提供了所述单克隆抗体的用途。本发明所抗体与CD47蛋白具有高亲和性，Kd值为0.2991×10^‑9M，结合特异性强，且能够显著体外促进人和小鼠巨噬细胞吞噬肿瘤。动物实验表明本发明提供的单克隆抗体能够有效抑制NOD/SCID鼠Burkitt’s淋巴瘤异种移植瘤，肿瘤抑制率约100％，并且显著延长小鼠生存期，具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗人CD47的单克隆抗体及其应用。

背景技术

CD47又称整合素相关蛋白(IAP)，为免疫球蛋白超家族的成员之一，是一个五次跨膜蛋白，由这五次跨膜区域片段以及一个短小的羟基端胞质尾区构成。CD47蛋白有3个结构域，其中一个IgV样细胞外结构域，已经证明能直接结合到信号调节蛋白α(SIRPα)上。SIRPα首次被发现是作为一种特异性的表达于脑组织细胞表面的糖蛋白的形式。当SIRPα与CD47相互作用后，介导SIRPα胞内域酪氨酸磷酸化，而SIRPα反作用于CD47使其胞内域的Cdc42被激活。

CD47是一个广泛表达的抗原，存在于大多数组织的多种细胞上。并且，CD47在大多数肿瘤细胞上的表达高于其相应的正常细胞，如肝癌、乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌等多种实体瘤细胞，以及AML、CML、ALL、NHL、MM等多种血液肿瘤。研究表明，CD47的高表达与不良预后相关。CD47作为最重要的“自我”识别分子，在免疫识别尤其是固有免疫识别中发挥着关键作用，被认为是调节固有免疫的检验点分子。CD47与骨髓来源的固有免疫细胞尤其是巨噬细胞表面的免疫负调控分子，SIRPα结合，释放“do not eat me”信号，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用，是肿瘤逃避免疫攻击的机制之一。

因此，阻断CD47与SIRPα的结合对于恢复抗肿瘤免疫反应，从而获得有效的肿瘤免疫治疗，是一个非常有希望的治疗策略。

目前以肿瘤治疗为目的提出了多种靶向CD47/SIRPα的策略。例如，将人SIRPα的结合域修饰成高亲和变体，同样的，CD47的变体也用于肿瘤免疫治疗。另外，抗体或者其他靶向CD47/SIRPα的阻断性药物能够阻断肿瘤细胞和巨噬细胞的相互作用从而诱导吞噬作用，具有有效治疗肿瘤的潜力。

对CD47的运用不是一帆风顺的。2012年6月，Celgene公司的CD47抗体CC-90002试验项目成立，此项目的临床前动物实验表明，CD47抗体CC-90002几乎对所有的肿瘤类型都有效果。然而在2018年底，Celgene公司中止了CD47单抗CC-90002用于治疗AML和MDS的单药临床试验。

CD47在红细胞上的表达量是随着细胞周期发生变化的，这种细胞表面表达量的变化使得衰老的红细胞表面CD47的表达量减弱，促使巨噬细胞对其进行吞噬，以保证红细胞在体内的平衡。然而，由于CD47药物的干预，在促进巨噬细胞清除肿瘤细胞的同时，由于正常血液系统表面CD47表达，因此CD47/SIRPα信号通路会参与红细胞吞噬过程的调节，也一定程度上参与血小板及淋巴细胞的调节，导致不可避免的误伤红细胞，导致红细胞凝集。在临床中，血液系统副作用例如贫血、血小板减少症成为限制CD47在临床上使用的限制因素，从而影响靶向CD47抗体药物的临床应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是降低CD47抗体的副作用，筛选出减少或者消除血红细胞结合力的CD47抗体。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种新型鼠抗人CD47抗体，在能够在人CD47和人或鼠SIRPα的结合中起到阻断作用，可应用于肿瘤免疫治疗。更重要的是，2C8在体外血细胞凝集试验中表现出良好的安全性。