[发明专利]一株分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一种分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19167。利用该菌株分泌获得的加米霉素单克隆抗体用于进行食品安全检测中加米霉素残留的分析检测。本发明获得的加米霉素单克隆抗体细胞株可以用于免疫分析检测，其对加米霉素有较好的检测灵敏度和特异性（IC₅₀值为0.82ng/mL、对加米霉素类似物交叉小于10%，交叉率=（加米霉素的IC₅₀/类似物的IC₅₀）×100%）。

技术领域

本发明涉及一株分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

加米霉素(Gamithromycin)是一种新型的动物专用的半合成大环内酯类兽用抗生素，通过抑制细菌RNA依赖性蛋白合成而起到抑菌和杀菌的作用，其具有抗菌谱广、抗菌活性强、低残留、安全高效等优点。在国外，加米霉素已被广泛应用于预防和治疗非泌乳牛、猪的呼吸系统疾病。在中国，加米霉素注射液于2017年通过农业农村部进口兽药注册在国内上市销售，用于治疗和预防由溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌等主要病原菌引起的牛呼吸系统疾病。然而，加米霉素在给药过程中可能存在使用不当等问题，在动物体内残留，再通过人的食用进入人体，对人类的身体健康产生不利影响，甚至威胁人类的生命。基于人们身体健康的重视，美国食品药物监督管理局(Food and DrugAdministration，FDA)规定加米霉素在牛肉和猪肉中最大残留限量(maximum residuelimit，MRL)值为0.1mg/kg。

对于加米霉素兽药残留的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对加米霉素的高效、快速的检测方法。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在兽药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测加米霉素的前提是得到对加米霉素具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对加米霉素具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC11及其应用。此杂交瘤细胞株分泌的加米霉素单克隆抗体对加米霉素具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为0.82ng/mL），可以用于建立加米霉素的免疫学检测方法，检测食品中加米霉素的残留。

本发明的技术方案，一株分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19167。

加米霉素单克隆抗体：它由所述保藏编号为CGMCC No. 19167的杂交瘤细胞株ABC11分泌产生。

本发明提供了上述一株分泌加米霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包含如下步骤：

（1）使用加米霉素半抗原制备加米霉素完全抗原，将获得的加米霉素完全抗原制备成含抗原弗氏佐剂与含抗原不完全弗氏佐剂；

（2）将得到的弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用完全弗氏佐剂，加强免疫采用不完全弗氏佐剂；

（3）将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中加米霉素抗体含量高的获得免疫的小鼠；