[发明专利]一种测定藜芦中化学成分含量的方法

权利要求书

1.一种测定藜芦中化学成分含量的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-质谱联用，同时测定藜芦中8种化学成分的含量；所述8种化学成分包括：藜芦托素、环巴胺、芥芬胺、藜芦胺、虎杖苷、槲皮素、芹菜素、白藜芦醇，所述方法包括：

(1)建立8种化学成分的标准曲线

以体积分数为60-100％的甲醇为溶剂，配制5-10个含有不同已知浓度的8种化学成分的混合对照品溶液；其中，环巴胺浓度为0.1-250ng/mL，藜芦托素、芥芬胺、槲皮素的浓度分别为0.1-450ng/mL，芹菜素的浓度为0.2-450ng/mL，白藜芦醇浓度为0.1-2000ng/mL，藜芦胺浓度为0.1-3500ng/mL，虎杖苷浓度为0.2-8000ng/mL；

在相同的色谱条件和质谱条件下，将体积V₁的各混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，通过质谱检测确定各色谱峰的化学成分，并获得各化学成分的色谱峰面积；

其中，所述色谱条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：A相为体积分数为0.05-0.15％的甲酸水溶液，B相为乙腈；采用体积分数53-85％A相，15-47％B相，梯度洗脱；流速：0.2-0.4mL/分钟；柱温：15-25℃；进样量V₁:3-8μL；所述梯度洗脱具体为：0-2分钟，15％-47％B；2-5分钟，47％-47％B；

以各化学成分色谱峰的峰面积为纵坐标，以各化学成分的浓度为横坐标，分别建立各化学成分的标准曲线；

(2)获得待测样品溶液的色谱峰面积；

将质量为M的待测样品，以体积为V₂的体积分数60-80％乙醇水溶液进行回流提取，取上清液过滤后作为待测样品溶液，其中，M/V₂为1：(10-20)g/mL；

在与步骤(1)中相同的色谱条件和质谱条件下，取体积V₁的待测样品溶液注入超高效液相色谱仪中，通过质谱检测确定各色谱峰的化学成分，并获得各化学成分的色谱峰面积；

(3)确定待测样品中8种化学成分的含量；

根据已建立的各化学成分的标准曲线，由待测样品溶液中各化学成分的色谱峰面积，分别获得各化学成分的浓度C₁，并按照下列公式分别计算出待测样品中8种化学成分的含量C；

C＝C₁×V₂/M。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合对照品溶液中，藜芦托素、芥芬胺、槲皮素、芹菜素的浓度分别为2-400ng/mL，环巴胺浓度为1-200ng/mL，藜芦胺浓度为15-3000ng/mL，虎杖苷浓度为35-7000ng/mL，白藜芦醇浓度为8-1600ng/mL。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以甲醇为溶剂，配制所述混合对照品溶液。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，以体积分数为60-100％的甲醇为溶剂，配制含有8种化学成分的混合对照品储备液，其中，环巴胺浓度为200-250ng/mL，藜芦托素、芥芬胺、槲皮素、芹菜素的浓度分别为400-450ng/mL，白藜芦醇浓度为1600-2000ng/mL，藜芦胺浓度为3000-3500ng/mL，虎杖苷浓度为7000-8000ng/mL；

以体积分数为60-100％的甲醇稀释所述混合对照品储备液，获得所述5-10个含有不同已知浓度的8种化学成分的混合对照品溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱为三重四级杆质谱，所述质谱条件包括：采用电喷雾离子源，以多反应离子检测作为检测模式，正负离子全扫描模式；毛细管温度设为250-350℃，干燥气流速8-15L/min；雾化器压力30-40psi；

质谱检测中8种化学成分的特征离子峰包括：