[发明专利]目的蛋白纯化方法

说明书

本发明提供了一种目的蛋白纯化方法。该方法包括：利用洗脱缓冲液对亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液中含有糖类物质。利用本发明提供的方法进行目的蛋白亲和层析，可以显著提高洗脱蛋白质的纯度，抑制洗脱过程中多聚体的产生，提高蛋白回收率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种目的蛋白纯化方法。

背景技术

蛋白质亲和层析技术适用于理化性质差异较小而难分离的蛋白质，亲和层析利用固相介质中的配基与混合生物分子之间亲和能力不同而进行分离，当蛋白混合液通过层析柱时，与配基能够特异性结合的蛋白质就会被吸附固定在层析柱中，这种结合在一定条件下是可逆的，待亲和层析结束后，可被洗脱缓冲液洗脱，而其他对配基不具有特异性结合能力的蛋白在上样与洗涤过程中即通过柱体而流穿，不能结合于柱体上。蛋白质亲和层析技术通过目标蛋白质与配体间特异性亲和结合而达到分离纯化的目的，具有生物专一性的特点。

但有些类型的蛋白尤其是Fc融合蛋白在酸性溶液中进行蛋白亲和层析纯化时，容易形成聚集体甚至形成可见的沉淀，而造成纯化后获得蛋白的纯度和回收率低。

因此，利用蛋白亲和层析技术进行蛋白纯化的方法仍需要进一步开发和改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够抑制洗脱过程中多聚体的产生，提高目的蛋白的纯度，提高目的蛋白回收率的方法。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种目的蛋白纯化方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：利用洗脱缓冲液对亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液中含有糖类物质。发明人意外地发现，在洗脱缓冲液中加入糖类物质，洗脱过程中不易产生蛋白多聚体，可大幅提高目的蛋白的纯度。

根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述糖类物质包括选自蔗糖、葡萄糖和乳糖的至少之一。发明人发现，在洗脱缓冲液中单独添加蔗糖、葡萄糖或者乳糖均可显著抑制洗脱蛋白质多聚体的产生，可大幅提高目的蛋白的纯度。

根据本发明的实施例，所述糖类物质在所述洗脱缓冲液中的浓度为0.1M-1M，根据本发明实施例的方法，所述糖类物质在该浓度范围内，对蛋白多聚体的产生有较好的抑制效果。

根据本发明的实施例，所述洗脱缓冲液包括柠檬酸缓冲液、乙酸盐缓冲液和甘氨酸缓冲液的至少一种。

根据本发明的实施例，所述洗脱缓冲液的pH为3-4。

根据本发明的实施例，所述洗脱缓冲液的pH为3.4-3.6。发明人发现，加入含有糖类物质的洗脱缓冲液在pH为3.4-3.6时能保障较高的回收率。

根据本发明的实施例，使用预装有中和液的容器收集所述洗脱液。现有技术中多在收集含有目的蛋白的洗脱液之后加入中和液进行中和，发明人发现，相比较于现有技术，使用预装有中和液的容器收集所述洗脱液，能进一步提高目的蛋白纯度和回收率。

根据本发明的实施例，所述待测样品包括选自发酵液和细胞培养物的至少之一。

根据本发明的实施例，所述亲和层析柱为Protein A亲和层析柱、Protein G亲和层析柱或Protein L亲和层析柱。