[发明专利]6α-乙基-23(S)-甲基胆酸在制备治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物中的应用

说明书

本发明公开了一种6α‑乙基‑23(S)‑甲基胆酸在制备治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物中的应用。本发明提供了激动剂6α‑乙基‑23(S)‑甲基胆酸的新用途，且效果好；研究机理的方法简便，准确。

技术领域

本发明涉及一种6α-乙基-23(S)-甲基胆酸的新用途。

背景技术

目前治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物，在治疗效果等方面存在一定缺陷，需要进一步寻找开发新的药物。6α-乙基-23(S)-甲基胆酸的作用尚未有可以制备治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种效果好的6α-乙基-23(S)-甲基胆酸在制备治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物中的应用。

本发明的技术解决方案是：

一种6α-乙基-23(S)-甲基胆酸在制备治疗周围神经脱髓鞘类疾病的药物中的应用。

其机理的研究方法包括下列步骤：

(1)细胞处理

实验对象为原代雪旺细胞；取出生一天的SD大鼠坐骨神经组织，然后通过胰酶、胶原酶消化的方法获得原代细胞，并且采用阿糖胞苷及HRG因子得到纯度大于90％的雪旺细胞；纯化好的细胞种植在六孔板中，分别设置不同的处理组别：对照组，cAMP阳性对照组，处理浓度为1mM；6α-乙基-23(S)-甲基胆酸处理组，处理浓度分别为5、10、25、125μM；及cAMP及6α-乙基-23(S)-甲基胆酸双处理组；处理24小时后收样，实验重复三次；

(2)雪旺细胞总RNA提取及基因表达检测

使用Invitrogen公司Trizol试剂提取雪旺细胞的总RNA，再用Roche公司的逆转录试剂盒进行cDNA第一链的合成；采用Roche公司的SYBR Green Supermix来做基因表达分析，仪器为Bio-Rad公司的iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System；分析结果采用2^-△△Ct法计算mRNA水平；以18S看家基因来校准mRNA的水平；所使用的引物序列如下：

18S rRNA正向引物：AGCTCCAATAGCGTATATTAAAG

18S rRNA负向引物：CGGTCCTATTCCATTATTCCTA

Krox20正向引物：TGGGTTTAAGTATGGCTGTATA

Krox20负向引物：AGTTAGTGGTTCTGTGTTAGA

MPZ正向引物：GGATAAGAAATAGCGGTTAGC

MPZ负向引物：TTGAGGCTGGTTCTACTG

OCT6正向引物：TTCCTAATTTCTGACCCATCT

OCT6负向引物：GCAATAAAGATACAAAGAGAATGG

(3)雪旺细胞蛋白提取及蛋白表达检测