[发明专利]一种单细胞遗传转化方法及其应用有效
| 申请号： | 202010586132.2 | 申请日： | 2020-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN113832176B | 公开（公告）日： | 2023-08-01 |
| 发明（设计）人： | 李来庚;曹树民;桂金山 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N5/10;C12N5/04;C12N5/02;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 单细胞 遗传 转化 方法 及其 应用 | ||
1.一种单细胞遗传转化方法，包括：
(1)从木本植物的组织获取悬浮细胞，包括将植物组织块在持续光照条件下进行振荡培养，所述的持续光照条件为每天光照超过20小时，获得胞内有红色物质沉淀的悬浮细胞；所述木本植物为杨柳科植物；
(2)将步骤(1)的悬浮细胞与含有待遗传转化目的基因的转化菌混合培养，之后除去转化菌；
(3)继续培养步骤(2)的悬浮细胞，筛选发生重组转化的细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述的持续光照条件为：每天光照超过22小时。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，光照强度1000～3000Lux。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，光照强度1500～2500Lux。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，(1)中，光照强度1800～2200Lux。
6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，在含有生长素或生长素类似物的MS培养基中培养；所述的生长素或生长素类似物为1.8～2.8 mg/L 的2,4-二氯苯氧乙酸。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的2,4-二氯苯氧乙酸在培养基中的浓度为2～2.7 mg/L。
8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的2,4-二氯苯氧乙酸在培养基中的浓度为2.4～2.6 mg/L。
9. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述悬浮细胞为椭圆状细胞或球状细胞；所述细胞分化程度较低，活性强。
10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述植物组织为植物叶片，或，所述植物组织块为植物叶片剪成的块状组织；或
所述的植物为苗期植物；或
所述的植物组织为无菌的植物组织。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述植物组织为苗期植物第3～5片叶片。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，培养温度为25±2℃。
13. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述振荡培养为在120±50 r/min振荡培养。
14. 如权利要求13所述的方法，其特征在于，(1)中，所述振荡培养为在120±20 r/min振荡培养。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，将植物组织块在持续光照条件下进行振荡培养，当细胞规模生长后，去除大的组织团块及细胞团。
16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，当细胞生长至粘稠或对数期时，进行稀释。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，(1)中，稀释2～8倍。
18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，每4～8天进行继代培养。
19. 如权利要求18所述的方法，其特征在于，每5±1天进行继代培养。
20.如权利要求1或16所述的方法，其特征在于，培养基中添加蔗糖20±5g/L；或
所述培养基的pH为5.8±0.3。
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