[发明专利]FACS-Ichip原位培养微生物装置及培养方法

权利要求书

1.FACS-Ichip原位培养微生物装置，包括带有培养孔(2)的培养板(1)，其特征在于：

将培养孔(2)的底部打穿形成通孔，作为培养仓；

在培养板(1)的反面设置下膜(3)，在培养板(1)的正面设置上膜(4)；

所述下膜(3)能密封的覆盖住所有的培养孔(2)的底部；

所述上膜(4)能密封的覆盖住所有的培养孔(2)的顶部。

2.根据权利要求1所述的FACS-Ichip原位培养微生物装置，其特征在于：下膜(3)和上膜(4)均为厚度为0.2～0.25μm的聚四氟乙烯膜。

3.根据权利要求1或2所述的FACS-Ichip原位培养微生物装置，其特征在于：

下膜(3)通过硅胶层与培养板(1)的反面相粘连；

上膜(4)通过硅胶层与培养板(1)的正面相粘连。

4.根据权利要求3所述的FACS-Ichip原位培养微生物装置，其特征在于：

培养板(1)为384孔的细胞培养板。

5.使用FACS-Ichip技术挖掘土壤微生物“暗物质”的方法，依次包括如下步骤：

1)、FACS-Ichip原位培养微生物装置的制作：

将培养孔(2)的底部打穿形成通孔，作为培养仓；

在培养板(1)的反面设置下膜(3)，下膜(3)能密封的覆盖所有的培养孔(2)的底部；

2)、将采集的微生物样品制备成微生物悬浊液；

3)、微生物分选、FACS-Ichip封装：

利用流式细胞仪通过FACS技术将活性单细胞分选至每个培养仓中，并向培养仓内加入培养基；在培养板(1)的正面设置上膜(4)，所述上膜(4)能密封的覆盖住所有的培养孔(2)的顶部；从而形成FACS-Ichip；

4)、原位培养：

将步骤3)所形成的FACS-Ichip放入模拟微生物样品生长的自然环境中进行原位培养；培养时间为1～4周；

5)、菌落富集与纯化：

将原位培养后FACS-Ichip从模拟微生物样品生长的自然环境中取出并清洗，剥离下膜(3)，对培养仓中的可见菌落进行接种培养与纯化。

6.根据权利要求5所述的使用FACS-Ichip技术挖掘土壤微生物“暗物质”的方法，其特征在于：

所述步骤1)为；将采集的微生物样品稀释，涡旋振荡并离心，离心所得的上清液用滤网过滤，得到微生物悬浊液。

7.根据权利要求6所述的使用FACS-Ichip技术挖掘土壤微生物“暗物质”的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，先采用染料通过流式仪的荧光分选能力判断微生物活性，然后利用流式细胞仪将活性单细胞分选至每个培养仓中。