[发明专利]一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法

说明书

本发明涉及一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，设置不同浓度的抗肿瘤药物实验组及对照组，其中抗肿瘤药物浓度为0并添加重水的一组作为阳性对照组(pos)，抗肿瘤药物浓度为0不添加重水的一组作为阴性对照组(neg)；将实验组与对照组培养后的肿瘤细胞消解下来离心清洗后滴加在低拉曼背景芯片上进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分别计算实验组和对照组的C‑D/(C‑D+C‑H)，根据实验组和对照组的C‑D/(C‑D+C‑H)确定待测抗肿瘤药物对肿瘤细胞是否有效。与现有技术相比，本发明从细胞代谢水平评估抗肿瘤药物的有效性，与传统方法中通过计算细胞数量评估药物有效性的方法相比，能更准确地评估某些仅抑制细胞生长而不抑制细胞代谢的抗肿瘤药物，进而指导用药。

技术领域

本发明属于药物筛选技术领域，尤其是涉及一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法。

背景技术

在抗肿瘤药物的体外研究中，常用的药效评估方法主要有CCK8、MTT、SRB法等，这些方法一般都是在测试前将抗肿瘤药物与细胞共培养，共培养时间一般为48-72h，然后加入反应试剂继续培养数小时，利用试剂与细胞组分之间的颜色反应及反应后溶液OD值与细胞数量呈线性关系的原理来计算药物的半数有效浓度，但这些方法存在操作繁杂、价格高和结果不稳定等缺点。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种简单的在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，通过拉曼-重水标记联用技术检测抗肿瘤药物作用后的细胞代谢活性，从代谢水平评估抗肿瘤药物的药效。

进一步地，本发明在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，具体包括以下步骤：

设置不同浓度的抗肿瘤药物实验组及对照组，其中抗肿瘤药物浓度为0并添加重水的一组作为阳性对照组(pos)，抗肿瘤药物浓度为0不添加重水的一组作为阴性对照组(neg)；

实验组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，分别加入不同浓度抗肿瘤药物，阳性对照组、阴性对照组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，不加入抗肿瘤药物，

实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水，阴性对照组继续培养第一时间段后不加入重水，继续孵育第二时间段后将细胞消解下来离心清洗，然后滴加在低拉曼背景芯片上进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分别计算实验组和对照组的C-D/(C-D+C-H)。

本发明，根据实验组和对照组的C-D/(C-D+C-H)确定待测抗肿瘤药物对肿瘤细胞是否有效。

在本发明的一个实施方式中，实验组中，药物浓度设置分别为0.5μM、1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、15μM、20μM。

在本发明的一个实施方式中，实验组和对照组中，细胞培养使用DMEM培养基。

在本发明的一个实施方式中，实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水的添加比例30％(v/v)。

在本发明的一个实施方式中，所述第一时间段为24h，第二时间段为48h。

在本发明的一个实施方式中，所述低拉曼背景芯片购于上海氘峰医疗器械有限公司，Cat No 1001。