[发明专利]一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法

权利要求书

1.一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，通过拉曼-重水标记联用技术检测抗肿瘤药物作用后的细胞代谢活性，从代谢水平评估抗肿瘤药物的药效。

2.根据权利要求1所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，包括以下步骤：

设置不同浓度的抗肿瘤药物实验组及对照组，其中抗肿瘤药物浓度为0并添加重水的一组作为阳性对照组，抗肿瘤药物浓度为0不添加重水的一组作为阴性对照组；

实验组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，分别加入不同浓度抗肿瘤药物，阳性对照组、阴性对照组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，不加入抗肿瘤药物，

实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水，阴性对照组继续培养第一时间段后不加入重水，继续孵育第二时间段后将细胞消解下来离心清洗，然后滴加在低拉曼背景芯片上进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分别计算实验组和对照组的C-D/(C-D+C-H)，根据实验组和对照组的C-D/(C-D+C-H)确定待测抗肿瘤药物对肿瘤细胞是否有效。

3.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，实验组中，药物浓度设置分别为0.5μM、1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、15μM、20μM。

4.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，细胞培养使用DMEM培养基。

5.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水的添加比例30％v/v。

6.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，所述第一时间段为24h，第二时间段为48h。

7.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，所述低拉曼背景芯片购于上海氘峰医疗器械有限公司，Cat No 1001。

8.根据权利要求2所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，使用WITEC-alpha300拉曼光谱仪采集细胞的拉曼图谱。

9.根据权利要求8所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，光栅600g/mm，光谱中心设置为2300，激光器选择532nm，光斑大小350nm；采集细胞的拉曼光谱时使用100倍物镜，在视野中找到细胞，然后将光斑聚焦到细胞中心，设置激光功率7～9mW，累积时间3s；每组采集20～30个细胞的拉曼图谱。

10.根据权利要求8所述在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，数据处理时截取1770～3400cm^-1图谱，然后使用仪器自带软件对数据进行去背景和归一化处理；C-D峰和C-H峰分别位于2000-2300cm^-1和2800-3100cm^-1；利用R studio软件计算C-D峰与C-D峰加C-H峰的面积比值，即C-D/(C-D+C-H)。