[发明专利]一种间充质干细胞PRP培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞培养基的PRP组分的制备方法，属于细胞培养领域。该方法是将富血小板血浆与无血清培养基按1：(0.5～100)的体积比混合，用红、绿、黄三色光线照射10～60min。本发明的方法制备得到的PRP组分，添加于培养基内，能显著提高间充质干细胞的增殖效果，效果优于胎牛血清。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种间充质干细胞PRP培养基及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞(MSC)是一种多能干细胞，它具有自我更新和多向分化能力，广泛存在于各类组织中。MSC在现代和未来医学领域中具有重要地位，其可能应用于：增强造血功能、修复各类组织器官损伤、治疗自身免疫性疾病、作为基因治疗的载体等等，大量相关临床实验已经陆续展开。

而培养MSC的培养基，是其临床研究和应用的基础，市场需求量大且处于持续增长状态。通常，MSC培养基需要补充血清(胎牛血清为主)，以补充细胞增殖所需的细胞因子。但血清来源十分容易受到病毒污染，带来安全隐患。

富血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)是由全血通过离心得到的富含血小板的血浆，其血小板浓度高于普通全血3倍以上，目前已经广泛应用于临床整形和创伤修复。PRP中含有多种生长因子，如血小板源性生长因子、类胰岛素生长因子、转化生长因子β2、表皮生长因子和血管内皮生长因子等，理论上可以促进间充质干细胞的增殖。然而，研究发现，在无血清细胞培养基中添加PRP并不能显著提高间充质干细胞的增殖，PRP对间充质干细胞增殖的促进作用甚至不如FBS(胎牛血清)。

LED(发光二极管，Light Emitting Diode)属于半导体固体发光器件，当半导体P-N结通以正向电流时，P区载流子发生复合，引起光子发射直接将电能转化为光能，目前己有红外、红、黄、绿、蓝、紫等各种发光二极管。LED具有冷光源、可调节波段、全固态、发光效率高、能耗低、功率小、单色性好、绿色环保、寿命长等特点，已被广泛应用于信号指示、装饰照明、液晶背光、通信等领域。近年来，随着LED光源技术巨大进步，LED在生物医学领域的应用越发广泛，主要用于医疗特殊灯具照明、疾病诊断、和医学治疗，其中在医学治疗领域，其临床上应用也越来越广泛，主要用于理疗、保健、美容等方面。

研究显示，LED光源辐射能够激活细胞，促进细胞增殖。如，Whelan等利用688nm的LED辐射人正常上皮细胞，结果显示上皮细胞增殖速率较正常对照组增长55-71％；利用670nm的LED辐射小鼠成纤维细胞，结果显示小鼠成纤维细胞DNA合成速率较正常对照组增加10％-43％，并且随天数增加其增长趋势呈降低规律。李燕等利用650±17nm波长LED刺激人皮肤成纤维细胞，结果发现刺激600秒后细胞总数比对照组显著增多。

目前未见将LED光源用于辐射处理富血小板血浆或血小板的报道。

发明内容

本发明的目的是：提供一种间充质干细胞PRP培养基及其制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种间充质干细胞培养基的PRP组分的制备方法，它是将富血小板血浆用红、绿、黄三色光线照射10～60min。

如前述的制备方法，所述红、绿、黄三色光线中，红光波长为620-625nm；和/或，绿光波长510-520nm；和/或，黄光波长585-590nm。

如前述的制备方法，所述红、绿、黄三色光线以LED为光源。

如前述的制备方法，所述红、绿、黄三色光线的光源各10个，其中：

每个红色光线的光源为1.9～2.5V的LED；

每个绿色光线的光源为3.0～3.2V的LED；

每个黄色光线的光源为1.9～2.2V的LED。