[发明专利]一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法

权利要求书

1.一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：（0.5～2）进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡0.5～2h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置2～3h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；

S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；

S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜的去除蛋清的鸡蛋黄若干，用滤纸擦干鸡蛋黄表面蛋清，再用滤纸折叠包裹鸡蛋黄，并用力致鸡蛋黄膜破裂，使鸡蛋黄流出到事先准备好的量筒中，将鸡蛋黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：（2～4）混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌20～40min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液；

S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；

S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心10～20min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温2～4h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；所述计算公式为：V=（V₁*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V₁为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力；

S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装；所述灌装器，包括注射器、点胶针头、硅胶垫片，所述硅胶垫片于点胶针头上部穿刺而过，并与注射器组装在一起，所述灌装器，包括注射筒（1）、活塞组件（2）、注射针头组件（3），所述注射筒（1）前端设置有喇叭形口颈（11），所述喇叭形口颈（11）前端设置有圆管形连接端（12）；所述活塞组件（2），包括活塞柄（21）、活塞杆（22）、活塞片（23），所述活塞柄（21）、活塞片（23）分别设置在活塞杆（22）的两端，所述活塞片（23）的前端设置有与喇叭形口颈（11）相适配的喇叭形堵塞（24），所述喇叭形堵塞（24）前端设置有圆柱形堵塞（25），所述活塞片（23）、喇叭形堵塞（24）、圆柱形堵塞（25）设置在注射筒（1）内；所述注射针头组件（3），包括针栓（31）、针梗（32），所述针栓（31）安装在圆管形连接端（12）上，所述针梗（32）外壁上设置有环形硅胶片（4），所述环形硅胶片（4）上设置有环形槽（41），所述针梗（32）前端设置有锥形台状针尖（33），所述锥形台状针尖（33）顶端设置连通针梗（32）和针栓（31）的内通孔（331），所述锥形台状针尖（33）外壁上设置有多个连通内通孔（331）的旁通孔（332），所述针栓（31）一端设置有外凸的环形限位片（34）；

S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。

2. 根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S1步骤中，所述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75 g/L，余量为水。

3.根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S2步骤中，以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，所述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。