[发明专利]新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液及其生产方法

说明书

本发明提供了一种新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液及其生产方法。该方法包括：在装填有片状载体的篮式生物反应器中加入细胞生长液，接种Vero细胞进行培养，至长成致密单层后，采用细胞维持液洗换；洗换结束后注入细胞维持液，进行新型冠状病毒的接种，病毒接种的MOI为0.005～0.4，病毒培养温度为36±1℃，溶氧≥40％，控制病毒培养阶段体系pH值为7.2～7.6；病毒接种后培养48～96h，收获病毒液。本发明应用篮式反应器成功培养获得了新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液，本发明细胞接种密度大，病毒滴度高，批间差异高度可控，质量均一；为新型冠状病毒灭活疫苗的大规模生产打下了坚实的基础。

技术领域

本发明是关于一种新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液及其生产方法，具体是一种应用篮式生物反应器以Vero细胞为基质生产新型冠状病毒灭活疫苗病毒液的方法，以及利用该方法生产得到新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液。

背景技术

2019年出现了一种新型冠状病毒，世界卫生组织(WHO)确认并命名为SARS-CoV-2，该病原感染所致的肺炎称为新型冠状肺炎。目前尚无特效药物对新冠肺炎进行有效治疗，新冠肺炎疫苗的研发迫在眉睫。

SARS-CoV-2是一种新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60～140nm。新型冠状病毒是继SARS病毒和MERS病毒后又一能引发严重急性呼吸道疾病且具有严重传染性的冠状病毒。冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具外套膜(envelope)的正链单股RNA病毒，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，只感染人、鼠、猪、猫、犬、禽类脊椎动物。冠状病毒最先是1937年从鸡身上分离出来，病毒颗粒的直径60-200nm，平均直径为100nm，呈球形或椭圆形，具有多形性。病毒有包膜，包膜上存在棘突，整个病毒像日冕，不同的冠状病毒的棘突有明显的差异。在冠状病毒感染细胞内有时可以见到管状的包涵体。

由于疫情突发，目前尚无新冠疫苗成品上市。为更大限度提升疫苗研发成功率，科研攻关组在梳理分析不同技术基础和可能性之后，布局了病毒的灭活疫苗、核酸疫苗、重组蛋白疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体疫苗这5条技术路线。

灭活疫苗采用了完整的病毒组成，它在制备过程中要通过理化方法灭活其致病性，还要通过灭活验证，而且仍然保持病毒的免疫原性，通过纯化工艺等制备过程，制备出候选疫苗。机体接种了候选疫苗可以刺激免疫反应，产生抗体，达到保护作用。灭活疫苗是一种成熟技术路线，具有质量标准可控、保护范围广等特点，我国灭活疫苗的研发制备基础较好，曾成功研发制备出H1N1流感灭活疫苗、甲型肝炎灭活疫苗、EV71手足口病灭活疫苗、Sabin株IPV脊灰疫苗等多款灭活疫苗。