[发明专利]一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶的生产方法

说明书

本发明低温淀粉酶生产方法技术领域，具体的说是一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶的生产方法，包括如下步骤：S1:于顶部入口处添加玉米粉、小麦粉、酵母膏、中蜂蜜、蛋白胨的混合物，然后再将盛放有中间气单孢菌的惰性气体罐上的加料管与发酵机的加料口连接，使得中间气单孢菌进入发酵机的内部，最后加入适量的去离子水，发酵时长为2‑3d，温度为15‑25℃；S2:发酵完后进行发酵液的取用时，将注射针管从发酵机的加料口插入，此时调节驱动橡胶圆环使得橡胶筒的底部上移，用注射针管吸出菌落；本发明大大减小了橡胶筒内溶液与空气的接触机会，从而可防止发酵液发生污染，且进行下一批的菌落的培养时，可直接从加料口注入原料，进而可实现持续化生产。

技术领域

本发明属于低温淀粉酶生产方法技术领域，具体的说是一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶的生产方法。

背景技术

淀粉酶是能催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其他低聚糖的一群酶的总称。低温淀粉酶是一个相对的概念，其最适作用温度相对于嗜温淀粉酶来说，最适反应温度比嗜温淀粉酶要低20-30℃，而且在0℃有一定的酶活。低温淀粉酶能在低温下有效发挥催化作用的特点，使其在生物工程领域及解决现代能源危机中有着广泛的应用前景。

目前针对于不同的生产方法对酶活性影响的研究也不胜枚举，专利号为CN1952115A的专利提出了一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶及其生产方法，其主要研究了金属离子和温度对酶活性的影响，以及在不同的温度和PH条件下的酶的热稳定性，从而得出适宜酶生张长的环境。现有技术中在进行低温淀粉酶的生产时，大多直接将原料直接加入发酵盒的内部，然后盖上密封盖，放置于一定温度的环境中，等待2-3天进行发酵，发酵好后，将菌落直接从发酵盒中倒出，再进行后续的低温淀粉酶的制备的操作，这种生产方法将会大大增加原料与空气的接触面积，从而导致发酵盒内空气过多，增加了原料被污染的几率，因而减小了发酵液制备成功的几率；且现有技术中的发酵盒在使用完后才能以后需要杀菌消毒以后才能继续进行下一批菌落的培养，而不能连续的进行菌落的培养，因而比较浪费生产时间。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，解决现有技术中原料与空气接触面积大，使得原料容易被污染以及现有技术中的发酵盒不能进行连续培养菌落问题，本发明提出的一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶的生产方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明所述的一种低温淀粉酶菌株、低温淀粉酶的生产方法，该方法包括如下步骤：

S1:打开发酵机顶部的密封塞，于顶部入口处添加玉米粉、小麦粉、酵母膏、中蜂蜜、蛋白胨的混合物，然后再加入惰性气体，排出发酵机内部的氧气，然后再将盛放有中间气单孢菌的惰性气体罐上的加料管与发酵机的加料口连接，使得中间气单孢菌进入发酵机的内部，最后加入适量的去离子水，去离子水中富含Ca²⁺，发酵时长为2-3d，温度为15-25℃；

S2:发酵完后进行发酵液的取用时，先拔出密封塞，将经过杀菌消毒后的注射针管从发酵机的加料口插入，此时调节驱动橡胶圆环使得橡胶筒的底部上移，通过环形可视窗观察发酵机内部液面情况，当注射针管能与发酵机内部发酵液接触时，用注射针管吸出菌落，塞上密封塞；

S3:将吸出的菌落诱导细胞在离心机中离心，取上清液将丝蛋白分离得到粗酶液；

S4:将S3所得的粗酶液中加入硫酸铵，再将粗酶液和硫酸铵的混合液冰浴搅拌，充分沉淀后，收集沉淀物；

S5:将沉淀物经硫酸缓冲液及凝胶柱处理层析分离，进行活性测定后收集活性部分，然后再经过脱盐、浓缩即可得低温淀粉酶成品；