[发明专利]一种利用Prep-HPLC法制备尿囊素的方法

说明书

本发明公开了一种利用Prep‑HPLC法制备尿囊素的方法，其包括提取山药提取液、干燥、溶解、制备液相纯化和尿囊素颗粒化五个步骤。本发明具有工艺简单、时间短、纯度高等优点，非常适用于山药中尿囊素的分离制备。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种山药中尿囊素的分离制备方法。

背景技术

山药是薯蓣科植物的干燥茎块，具有生津益肺、补脾养胃、补肾益精的功效。山药既是食用滋补佳品，又是常用中药材，可用于治疗脾虚久泻、慢性胃炎、慢性肠炎、肺虚咳喘、遗尿滞下和遗精等症状。研究发现，山药中含有尿囊素、粘液多糖、粘液蛋白等多种活性成分。尿囊素是山药中的重要有效成分之一，具有抗刺激、镇痛麻醉、去腐生肌等功效，能促进上皮组织的修复、皮肤溃疡以及伤口的愈合，可用于治疗多种角化皮肤病和消化性溃疡。此外，最新研究发现，尿囊素还被用于治疗糖尿病、骨髓炎、肝硬化及癌症。

尿囊素在轻工品、医药、日化等众多领域有着广泛应用。其具有镇静、局部麻醉等作用，内服可用于消化道溃疡，外用既能促进皮肤溃疡面和伤口愈合，也可促进黏膜上皮细胞的再生，刺激健康组织生长。因此，山药中的尿囊素具有重要的药理、作用。由于良好的临床治疗效果，尿囊素正作为外用制剂广泛应用，此外，尿囊素还具有抑制流感病毒的功效，能用于保护损伤的胃黏膜，在治疗糖尿病、骨髓炎、肝硬化及癌症方面也发挥了重要功效。

尿囊素是极性物质，一般选用极性溶剂提取。然而山药中含有大量淀粉和糖浆，提取时如果用热水易形成粘稠状的糊液，过滤困难，因此水与醇的混合溶液通常被用作提取溶剂。

目前尿囊素的主要提取方法为：超声法、回流法、溶剂热法对山药中的尿囊素进行提取。尿囊素的主要检测方法为：高效液相色谱法、毛细管电泳法、荷光光度法、薄层扫描法等多种方法。在上述的方法中只能提取出山药中的提取物，成分复杂，当需要分析其含量或者分离出尿囊素化合物时，需要与相应的检测方法及分离方法联合使用，操作复杂、浪费资源等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单直接、尿囊素纯度高、收率高的Prep-HPLC制备液相分离纯化尿囊素的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供的技术方案如下：

一种利用Prep-HPLC法制备尿囊素的方法，步骤如下：

(1)提取：取山药原药材，加入15-20倍的水，60℃加热回流提取1～3次，每次2～3小时，过滤得到山药提取液；

(2)干燥：将山药提取液利用旋转蒸发仪干燥，得到山药提取物粉末；

(3)溶解：称取山药提取物粉末，溶解于50％甲醇中，过0.22μm微孔滤膜后得到澄清山药提取物溶液；

(4)制备液相纯化：色谱柱为：C18反相色谱柱，具体色谱条件为：流动相为甲醇(A)和水，梯度洗脱，流速8mL/min，检测波长224nm，柱温30℃；

(5)获取尿囊素：收集尿囊素馏分，干燥，得到尿囊素粉末。

进一步地，步骤(4)中梯度洗脱的条件为：