[发明专利]一种PTEN-Long多克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种新的PTEN‑Long兔多克隆抗体及其制备方法。该抗体由如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗原免疫日本大耳白兔后，分离纯化血清获得，其与PTEN‑Long蛋白结合能力强。本发明的PTEN‑Long兔多克隆抗体的亲和力高，对病毒、肿瘤、代谢和神经方面疾病的诊断和治疗具有指导意义，具备良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种PTEN-Long兔多克隆抗体的制备方法和用途。

背景技术

PTEN基因编码的蛋白具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酶活性，是第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，也是继p53和Rb基因之后，与肿瘤发生密切相关的一种抑癌基因，其主要机制为PTEN是PI3K/Akt通路的主要负调控因子。

PTEN的功能缺陷在人类多种肿瘤中广泛存在。同源性磷酸酶-张力蛋白L亚型即PTEN-Long(NP_001291646.4)是一个新鉴定的PTEN亚型，n端加入了173个氨基酸。PTEN-Long是一个新的通过其蛋白磷酸酶活性对抗磷酸化泛素的噬菌体负调节剂，其定位于线粒体外膜，PTEN-Long缺失促进各种线粒体损伤，诱导的吞噬作用，进而引起许多重要的人类疾病，包括神经退行性疾病，如帕金森氏症的关键过程。

进一步的研究表明，PTEN-Long基因在正常的组织，细胞，体液(血清，尿液，前列腺液)等样本中的表达水平与病变组织中存在明显差异，通过检测PTEN-Long的表达水平可以辅助肿瘤，代谢病，神经疾病，心血管病等的诊断。抗原抗体检测是检测基因表达非常通用的方法，但是其检测的准确度、灵敏度等依赖于优良的抗体，目前未见PTEN-Long抗体的任何报道。

发明内容

为了解决前述问题，本发明提供一种新的高亲和力的PTEN-Long抗体的其制备方法及其应用。

本发明PTEN-Long抗体，该抗体是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示所述的蛋白作为免疫原制备得到的抗体。

优选地，所述抗体为多克隆抗体。

优选地，所述多克隆抗体为兔多克隆抗体。

本发明还提供了一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了制备前述的PTEN-Long抗体的方法，所述方法包括如下步骤：

1)制备氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白抗原；

2)接种免疫；

3)采血；

4)分离纯化，即可。

优选地，步骤2)中，接种免疫的对象为兔，优选为日本大耳白兔；和/或每只兔子接种的免疫原的剂量400～600μg/次，优选500μg/次接种4～5次。

优选地，接种免疫原时，加入佐剂；优选地，首次免疫时，将免疫原与等体积的完全弗氏佐剂制成乳化剂，背部皮下多点注射，之后每次免疫所用佐剂为不完全弗氏佐剂，其用量与免疫原等体积。

优选地，步骤4)中，所述分离纯化的方法包括：Protein A亲和纯化、HABP亲和纯化及抗原亲和纯化；

其中，Protein A亲和纯化为：

取Protein A亲和柱，上样，用平衡缓冲液进行淋洗，再用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，其中，平衡缓冲液为包含浓度为50mM的Tris以及浓度为100mM的NaCl的溶液，洗脱液为包含浓度为100mM的Glycin以及浓度为10mM的NaCl的溶液；

HABP亲和纯化为：取HABP亲和柱，上样，用平衡缓冲液淋洗，收集流穿液，其中，平衡缓冲液为包含浓度为50mM的Tris以及浓度为100mM的NaCl的溶液；