[发明专利]一种PTEN-Long多克隆抗体及其制备方法和用途有效
申请号: | 202010530721.9 | 申请日: | 2020-06-11 |
公开(公告)号: | CN111763260B | 公开(公告)日: | 2022-03-29 |
发明(设计)人: | 艾建忠;郑筱男;徐航;曹德宏;易贤彦翎 | 申请(专利权)人: | 四川大学华西医院 |
主分类号: | C07K16/40 | 分类号: | C07K16/40;C07K16/06;C07K1/22;C12N9/16;G01N33/574;G01N33/573;A61K39/395;A61P35/00;A61P3/00;A61P25/00;A61P9/00 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡;张娟 |
地址: | 610000 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 pten long 克隆 抗体 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种蛋白,其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种制备PTEN-Long抗体的方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:
1)制备氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白抗原;
2)接种免疫原;
3)采血;
4)分离纯化,即可。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤2)中,接种免疫原的对象为兔;和/或每只兔子接种的免疫原的剂量为:400~600μg/次接种4~5次。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述接种免疫原的对象为日本大耳白兔,和/或每只兔接种的免疫原剂量为,500μg/次,接种4~5次。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:接种免疫原时,加入佐剂。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,首次接种免疫原时,使用完全弗氏佐剂,之后每次免疫所用佐剂为不完全弗氏佐剂。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤4)中,所述分离纯化的方法包括:
Protein A亲和纯化、HABP亲和纯化及抗原亲和纯化;
其中,Protein A亲和纯化为:
取Protein A亲和柱,上样,用平衡缓冲液进行淋洗,再用洗脱液洗脱,收集洗脱峰,其中,平衡缓冲液为包含浓度为50mM的Tris以及浓度为100mM的NaCl的溶液,洗脱液为包含浓度为100mM的Glycin以及浓度为10mM的NaCl的溶液;
HABP亲和纯化为:取HABP亲和柱,上样,用平衡缓冲液淋洗,收集流穿液,其中,平衡缓冲液为包含浓度为50mM的Tris以及浓度为100mM的NaCl的溶液;
抗原亲和纯化为:取抗原亲和层析,上样,用平衡缓冲液淋洗再用洗脱液洗脱,收集洗脱峰,其中,平衡缓冲液为包含浓度为50mM的Tris以及浓度为100mM的NaCl的溶液,洗脱液为包含浓度为100mM的Glycin以及浓度为10mM的NaCl的溶液。
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