[发明专利]一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基及细胞培养方法

说明书

本发明公开了一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基及细胞培养方法，属于细胞培养的技术领域，解决了传统培养基中的血清的引用带来的微生物污染、实验结果稳定性差的问题。培养基中的血清替代物的添加量为3.5~4.5%，包括以下组分：人血清蛋白、转铁蛋白、纤粘连蛋白、层粘连蛋白、维生素B₂、辅酶A、维生素B₁₂、血管内皮生长因子、血管内皮生长因子2型受体、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、促红细胞生成素、胰岛素样生长因子、胰岛素、重组人生长激素、蛋白酶抑制剂、L‑谷氨酰胺、转化生长因子、白细胞介素21、造血细胞生长因子等。本发明的培养基具有无微生物污染、实验过程稳定的优点。

技术领域

本发明涉及细胞培养的技术领域，更具体地说，它涉及一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基及细胞培养方法。

背景技术

间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。间充质干细胞来源于多种组织：如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等。

2001年，研究者首次从人体脂肪组织的提取物中分离出具有多向分化潜能的细胞，将其命名为脂肪组织提取细胞(processde lipoaspirate cells，PLA细胞)，后称之为脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs)。ADMSCs具有自我更新及多向分化潜能，同时具有横向的跨胚层分化能力。由于ADMSCs不仅具有来源广泛、取材容易等特点，而且不涉及伦理道德问题，因此可以作为组织工程的种子细胞。目前ADMSCs的研究已经成为近年来干细胞研究的热点之一。很多研究也已经证实ADMSCs具有向心肌细胞、脂肪细胞、神经细胞、骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞等多谱系分化的潜能。这些研究结果对心肌、骨、软骨、神经等方面的再生具有重要意义。

目前对于脂肪来源的间充质干细胞的培养所采用的传统培养基是基础培养基加以胎牛血清后混合而成的，授权公告号为CN 101314766 B的发明专利公开了一种分离培养人脂肪间充质干细胞的方法及其专用培养基，该人脂肪间充质干细胞的分离培养用培养基，包括动物细胞基础培养基、胎牛血清、表皮生长因子和血小板衍生生长因子，其中胎牛血清的终浓度为1-200mL/L。授权公告号为CN 103857789 B的发明专利公开了一种制备间充质干细胞基础培养基和利用间充质干细胞基础培养基制备细胞治疗产品的方法及用该培养基得到的分化产品，其中L，间充质干细胞基础培养基包括选自胎牛、马或人的血清中的一种，且胎牛血清的添加量为10-20％。授权公告号为CN 104263697 B的发明专利公开了一种诱导培养基及诱导人脂肪间充质干细胞生成胰岛素分泌细胞的方法，其中该诱导培养基包括溶剂DMEM-高糖培养基和10％胎牛血清。

但是，虽然胎牛血清富含细胞体外培养所需要的生长因子，同时却也存在以下的不足：胎牛血清的具体成分不确定，不适合重复性实验；具有微生物污染(病毒，细菌，内毒素等)；伦理问题(胎牛的不正常死亡可获取胎牛血清)。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基，其具有使得细胞培养过程安全无污染且培养得到的脂肪间充质干细胞纯度高，质量好的优点。

本发明的第二个目的在于提供一种利用无血清的脂肪间充质干细胞的培养基的细胞培养方法。

为实现上述第一个目的，本发明提供了如下技术方案：一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基，所述培养基包括基础培养基和血清替代物，所述血清替代物的添加量为基础培养基质量的3.5～4.5％，所述血清替代物包括以下组分，各组分的终浓度分别为：