[发明专利]一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基及细胞培养方法

权利要求书

1.一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括基础培养基和血清替代物，所述血清替代物的添加量为基础培养基质量的3.5~4.5%，所述血清替代物包括以下组分，各组分的终浓度分别为：

人血清蛋白1~1.5 g/L；白蛋白153~208 mg/L；转铁蛋白8~12 mg/L；纤粘连蛋白4~7mg/L；层粘连蛋白2~9 mg/L；雌二醇2~4 μg/L；维生素B₂ 256~261 mg/L；辅酶A 150~167mg/L；维生素B₁₂ 187~249 mg/L；牛磺酸1.8~3 mg/L；丙酮酸7.23~29.42 mg/L；西那卡塞35.74~71.48 ng/L；血管内皮生长因子4~12 μg/L；血管内皮生长因子2型受体5~14 μg/L；表皮生长因子5~12 μg/L；血小板衍生生长因子120~150 μg/L；碱性成纤维细胞生长因子5~14 μg/L；促红细胞生成素0.5~0.8 μg/L；胰岛素样生长因子5~8 μg/L；胰岛素2~4.5 mg/L；重组人生长激素21~34 mg；蛋白酶抑制剂2~3.6 μg/L；胰酶抑制剂0.3~0.8 mg/L；L-谷氨酰胺321~436 mg/L；转化生长因子-α 1~4 μg/L；转化生长因子-β 1~4 μg/L；白细胞介素211.5~3.5 μg/L；造血细胞生长因子1~2.5 μg/L；

所述血清替代物还包括抗炎抗敏物质，所述抗炎抗敏物质包括：地塞米松0.36~1.09mg/L；重组人TSG-6蛋白2~5 mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种无血清的脂肪间充质干细胞的培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12。

3.一种利用权利要求1-2任一所述的无血清的脂肪间充质干细胞的培养基的细胞培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1将血清替代物加入基础培养基中，制成含质量分数为3.5~4.5%的无血清的脂肪间充质干细胞的培养基；

S2 将消化人脂肪组织后得到的收集细胞接种在所述无血清的脂肪间充质干细胞的培养基中培养72 h即可。

4.根据权利要求3所述的一种利用无血清的脂肪间充质干细胞的培养基的细胞培养方法，其特征在于，所述收集细胞的细胞密度为（1~2）×10⁶个/mL。

5.根据权利要求3所述的一种利用无血清的脂肪间充质干细胞的培养基的细胞培养方法，其特征在于，所述人脂肪组织的消化步骤包括：

取20 mL的质量分数为0.25%的胰酶液加入到30 mL的生理盐水中并混匀，得到消化液；

于细胞汇合度达到80%以上的脂肪组织中加入所述消化液，使得消化液充分浸润细胞液；

待镜下观察细胞变圆后，再加入所述消化液，均匀浸润细胞面后终止消化；

将细胞悬液离心，随后弃上清液，震散细胞沉淀即可。