[发明专利]一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒

权利要求书

1.一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为反应缓冲液，所述试剂2为NGAL抗体致敏胶乳溶液，其特征在于，所述试剂1与所述试剂2的混合物中含有人白蛋白和人IgG；

所述试剂1与所述试剂2的混合物中，人白蛋白终浓度不低于10000/x mg/L，人IgG终浓度不低于2000/x mg/L；其中x为待检测样品在所述试剂1与所述试剂2的混合物中的稀释倍数。

2.根据权利要求1所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述人白蛋白添加于所述试剂2中，所述人IgG添加于所述试剂1中。

3.根据权利要求2所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1中除人IgG外，还包括：试剂1缓冲液，电解质，表面活性剂，防腐剂，促凝剂和阻断剂。

4.根据权利要求3所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1中除人IgG外，还包括：pH6.8-7.5的100mM Hepes-NaOH背景缓冲溶液，氯化钠23.38-116.88g/L，吐温-205-20mL/L，proclin-300防腐剂0.35mL/L，聚乙二醇60005-15g/L，Scantibody HBR-26阻断剂或菲鹏生物E-015阻断剂2-2.5mL/L。

5.根据权利要求2所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2中除人白蛋白外，还包括：试剂2缓冲液，胶乳颗粒，抗体，表面活性剂，防腐剂和封闭剂。

6.根据权利要求5所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2中除人白蛋白外，还包括：pH7.6-8.2的50mM Taps-NaOH背景缓冲液，羧基胶乳3g/L，NGAL兔多克隆抗体5mL/L，吐温-20 6mL/L，proclin-300防腐剂0.35mL/L，牛血清白蛋白1g/L；所述NGAL兔多克隆抗体选用Dako公司货号为OA995、浓度为5mg/mL的NGAL兔多克隆抗体。

7.根据权利要求1所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2的制备包括如下步骤：

(1)将抗体与胶乳颗粒共价偶联，先不进行封闭，获得胶乳溶液；

(2)向所述胶乳溶液中加入尿素，使胶乳溶液中尿素终浓度为10-20mM/L，37℃下120rpm恒温孵育1h，获得胶乳试剂；

(3)将步骤(2)获得的胶乳试剂中50％背景溶液弃去，换为支架溶液；

所述支架溶液为中部酸性、两端含半胱氨酸的环肽的氨基酸支架溶解于支架溶解液中制得；

所述氨基酸支架结构如式I所示，式中K为赖氨酸，C为半胱氨酸，X为3-4个自由组合的酸性氨基酸；

所述氨基酸支架的用量为：每mg抗体对应0.010-0.020mg氨基酸支架；

(4)向步骤(3)获得的混合有氨基酸支架的胶乳试剂中滴加50mmol/L的过硫酸钾溶液，于37℃下120rpm恒温孵育30min；所述过硫酸钾的摩尔量为步骤(2)中尿素用量的35-50％；

(5)对步骤(4)孵育后的胶乳试剂离心，弃去所有上清，加入封闭清洗液进行封闭清洗，制得试剂2。

8.根据权利要求7所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述支架溶解液为100mM/L pH7.5，含0.1％v/v吐温-20的PBS缓冲液；所述过硫酸钾溶液为使用所述支架溶解液对过硫酸钾溶解获得；所述封闭清洗液成分包括：pH7.6-8.2的50mM Taps-NaOH背景缓冲液，吐温-20 6mL/L，proclin-300防腐剂0.35mL/L，牛血清白蛋白1g/L；并且添加有人白蛋白。

9.根据权利要求8所述的一种高准确性尿液中NGAL检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(5)中，对步骤(4)孵育后的胶乳试剂离心，弃去所有上清，加入封闭清洗液复溶，使胶乳终浓度为1-4g/L，室温混匀2小时，制得试剂2。