[发明专利]一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中拉西地平浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱法测定血浆中拉西地平的方法，属于药物分析技术领域。本发明建立了液相色谱‑串联质谱法测定人血浆中拉西地平浓度的方法，血浆样品以沉淀蛋白法处理后，采用Luna PFP色谱柱快速梯度洗脱色谱分离，经串联四极杆质谱仪检测。质谱监测离子反应为m/z 473.5→354.3（拉西地平）和m/z 481.4→362.3（拉西地平‑¹³C₈）。采用本发明的方法可以实现对血浆中拉西地平的快速、灵敏检测，可以应用于拉西地平仿制药的生物等效性研究。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中拉西地平浓度的方法。

背景技术

拉西地平（Lacidipine，Lac）为第三代二氢吡啶类钙拮抗剂，其降压作用温和持久，用量少，副作用小，临床上将其列为治疗轻、中度原发性高血压（EH）的首选药物之一。

拉西地平仿制药研发过程中需要进行临床生物等效性研究，对比仿制药物和原研药物在人体内暴露量及吸收程度。因此需要测定血液中拉西地平的浓度。拉西地平临床用药量为每日4-8mg，服用4mg后单次给药的达峰浓度为2-8ng/ml，但现有的检测方法的灵敏度较差，受限于检测方法灵敏度，临床研究中常常通过增加药物剂量的方法，提升药物在血液中的浓度，进而获得完整的药物动力学参数。药物剂量的提升容易对受试者的身体造成不良影响。另外现有方法也存在操作复杂、需要耗时的浓缩步骤、分析时间长、信噪比不佳等特点。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种灵敏的液相色谱-串联质谱法测定血浆中拉西地平的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中拉西地平灵敏、快速检测；而且血浆用量少，样品前处理简单。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中拉西地平浓度的方法，包括如下步骤：

（1）对血浆样品进行前处理；

（2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中拉西地平的浓度；

所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中：

所述色谱条件包括：以体积百分数为0.005%的甲酸水溶液作为流动相A，以乙腈作为流动相B，梯度洗脱，在0min时，流动相A：流动相B体积比为20:80，在0.6min时，流动相A：流动相B体积比为50:50，在1.5min时，流动相A：流动相B体积比为75:25，在2.4min时，流动相A：流动相B体积比为45:55，在3.2min时，流动相A：流动相B体积比为25:75，在3.5min时，流动相A：流动相B体积比为20:80；流速0.6mL/min。

所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：500℃；雾化气：65 psi；气帘气：35 psi；碰撞气：9 psi；电离电流：3.0 μA；扫描时间：200 ms；扫描方式：多反应监测。用于定量的离子反应分别为：m/z 473.5 → 354.3（拉西地平）和m/z 481.4→362.3（拉西地平-¹³C₈）；碰撞能量20 eV。

优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向50 µL血浆样品中加入50µL内标溶液，再加入400 µL的乙腈，涡流振荡10min，4℃条件下以3900 rpm速度离心10min，将离心后的上清液转移至另一96孔板中。

更优选的，所述内标溶液为50 ng/mL的拉西地平-¹³C₈溶液，溶剂为体积比50:50的甲醇：水混合液。