[发明专利]一种用于快速高效扩增人B淋巴细胞体外扩增的细胞及其构建方法

权利要求书

1.一种用于快速高效扩增人B淋巴细胞体外扩增的细胞，其特征在于，所述细胞为过表达CD40L基因、IL21基因和BAFF基因的贴壁细胞。

2.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述细胞为3T3贴壁细胞。

3.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于，先构建过表达CD40L基因和IL21基因的重组细胞，再转入BAFF基因。

4.权利要求1到3任一所述细胞在快速高效体外扩增人B淋巴细胞中的应用。

5.一种快速高效体外扩增人B淋巴细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将权利要求1所述细胞弃去培养液，加入含有丝裂霉素C的含有质量分数5％～10％FBS的DMEM培养液，培养，培养液中丝裂霉素C的终浓度为50～150μg/ml；

S2.弃去培养液，用PBS洗去残存的丝裂霉素；

S3.用胰酶消化细胞后，铺板，贴壁生长后去除培养液；

S4.B细胞加入上一步获得的已贴壁的细胞上，培养基为IMDM培养液加入质量分数5％～10％人AB血清，100～200U/ml青霉素，0.1～0.2mg/ml链霉素，10～50mM/L Hepes，0.1～0.5mM MEM NEAA，1～2mM丙酮酸钠，每三天更换一次培养液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S1中，培养液中丝裂霉素C的终浓度为100μg/ml。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S1中，用PBS洗涤3～5次。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S1中，使用六孔板培养，权利要求1所述细胞(7～9)×10⁵/孔铺板，B细胞以(2～5)×10⁴/孔加入步骤S3获得的已贴壁的细胞上。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，权利要求1所述细胞用量为8.5×10⁵/孔，B细胞的用量为2×10⁴/孔。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S4中，使用的培养基为IMDM培养液+质量分数10％人AB血清+100U/ml青霉素+100μg/ml链霉素+100μg/ml Hepes+0.1mM MEMNEAA+1mM丙酮酸钠。