[发明专利]一种金边鲤的育种方法

权利要求书

1.一种金边鲤的育种方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：建立亲本档案

组成金边鲤的亲鱼群体，植入PIT电子标记，建立电子档案；所述金边鲤的亲鱼群体具有如下性状：背鳍两侧从头部顶端至尾鳍基部有完整的金色鳞片，体形匀称、无伤病且性腺发育良好；

步骤2：分析亲鱼群体的基因型及遗传组成

步骤2.1：从亲鱼群体的血液或鳍条组织中提取基因组DNA；

步骤2.2：选择微卫星编号为HLJ3579、HLJ2424、CAFS724、HLJ2456、HLJ3289、HLJ3271、HLJ2891、HLJ2387、CAFS1541、HLJ2783、HLJ2282、CAFS1846、CAFS1950、HLJ2300、HLJ526、HLJ3366、HLJ2474、HLJ1254、CAFS0882、CAFS2137、HLJ1306和HLJ1944的22个微卫星位点，所述22个微卫星位点的特异性引物序列分别如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.44所示，利用上述22个微卫星位点的特异性引物，且上游引物的5′端均采用荧光标记，以步骤2.1提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，得到PCR产物；

步骤2.3：用毛细管凝胶电泳分析步骤2.2得到的PCR产物，获得基因型数据；

步骤3：遗传分析与繁殖群组划分

利用GenePOP32生物软件,统计22个微卫星位点的等位基因数Na、有效等位基因数Ne、等位基因频率P、观测杂合度Ho和预期杂合度He，计算出多态信息含量PIC；计算出遗传距离；绘制进化树，划分繁殖群组；

步骤4：配对繁殖

当亲鱼群体处于高度多态水平时，选择不同繁殖群组的雌、雄个体进行群体繁殖，即完成育种。

2.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤1中，所述植入PIT电子标记的具体方法是：将筛选出的亲鱼群体作为样本，用质量百分浓度为3％的盐水浸洗，再用质量百分浓度为5％的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐麻醉，擦干背鳍基部右侧1cm处，用注射器将PIT标记缓慢推入肌肉，用扫码器读出标记号并记录每个样本的电子标记号。

3.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤2.2中，所述荧光标记为FAM、HEX和TAMRA中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤2.2中，所述PCR扩增反应的程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，56℃复性30s，72℃延伸30s，共25个循环；72℃延伸5min。

5.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤2.2中，所述PCR扩增反应的体系以15μL计为：模板100ng、上游引物0.3μmol/L、下游引物0.3μmol/L、1UTaqDNA聚合酶、pH值为8.3的Tris-Cl终浓度为10mmol/L、KCl50mmol/L、MgCl₂1.5mmol/L、dNTP200μmol/L和ddH₂O补足15μL。

6.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤2.3中，所述毛细管凝胶电泳采用ABI3730XL基因测序仪进行，采用GeneMappre V4.1软件进行图像收集和数据分析，获得基因型数据。

7.根据权利要求1所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤3中，所述多态信息含量PIC的计算公式为：

式中，p_i、p_j分别为群体中第i和第j个等位基因频率，j＝i+1，n为某一基因座上等位基因数。

8.根据权利要求1-7任一项所述的金边鲤的育种方法，其特征在于，步骤4中，所述高度多态水平是指多态信息含量PIC0.5。