[发明专利]一种体外活化免疫细胞的方法

说明书

本发明关于一种体外活化免疫细胞的方法，该方法是以含有Muparfostat的培养基进行外周血单个核细胞的培养，有效抑制自然杀伤细胞及T细胞于细胞表面表达LAG‑3，藉由阻断细胞抑制性讯号的传递，增强自然杀伤细胞及T细胞的活性。

技术领域

本发明是关于一种体外活化免疫细胞的方法。

背景技术

免疫细胞治疗是将病人本身的免疫细胞在体外增殖和活化后，再回输至体内的一种治疗方式。目前免疫细胞治疗已逐渐被应用于癌症治疗上，成功的关键在于了解各类免疫细胞的特性和功能，并根据癌症患者的状况及基因特性来选择最合适的免疫细胞类型，例如自然杀伤细胞(NK细胞)、T细胞等。

免疫细胞存在于外周血液。自血液分离出的外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell，PBMC)中，存在数种类型的细胞，包含血球细胞、淋巴球细胞及血小板。其中，淋巴球细胞即包含NK细胞、T细胞、NKT细胞、B细胞等免疫细胞。

由于NK细胞及T细胞的活性是受到活化或抑制性受体的调控。其中，表达于NK细胞及T细胞表面的LAG-3，属于抑制性的受体，亦称为免疫检查点。当LAG-3与其配体结合时，将对NK细胞或T细胞传导抑制性的讯息，进而抑制NK细胞或T细胞的活性。因此以NK细胞及T细胞进行细胞疗法的挑战在于是否能够使该细胞持续被活化，不被抑制性受体的讯息所抑制。近几年发现，使用抗LAG-3抗体能够阻断LAG-3所传导的抑制性讯息，促进NK细胞或T细胞活化。然而，抗LAG-3抗体用于培养细胞仅提供暂时性的阻断效果，不但成本高且LAG-3抗体尚于试验阶段，注射至人体内仍存在一定疑虑，因此仍极需要开发出一种方便、有效、安全的体外活化免疫作用细胞的方法。

Muparfostat，又称为PI-88，是天然酵母菌发酵产物经磺化所得的磺酸化单磷酸甘露寡聚糖，已知为乙酰肝素酶抑制剂(heparinaseinhibitor)，具有抑制血管新生及抑制癌细胞转移的效果。Muparfostat应用于体外免疫细胞培养方法与效用，目前未有相关研究。

发明内容

本发明于一方面，提供一种体外活化免疫细胞的方法，其包含以下步骤：自一血液检体分离出外周血单个核细胞；自该外周血单个核细胞悬浮于一含有Muparfostat的培养基并置于一细胞培养盘中；每日于该培养基添加Muparfostat，培养4至18天。

在一具体实施例中，前述Muparfostat每日于培养基添加的量是300μg/ml；在一较佳实施例中，前述培养基另包含基础培养基及细胞激素。在另一较佳实施例中，该细胞激素是白介素2；其中该白介素2于该培养基的浓度是介于500至1000IU/ml。

在一具体实施例中，前述免疫细胞包含自然杀伤细胞及T细胞。

本发明于另一方面，提供一种体外抑制免疫细胞表达LAG-3的方法，其包含以下步骤：自一血液检体分离出外周血单个核细胞；自该外周血单个核细胞悬浮于一含有Muparfostat的培养基并置于一细胞培养盘中；每日于该培养基添加Muparfostat，培养4至18天。

前面的概述，以及本发明以下的详细描述，在结合图式一起阅读时将可以被更好地理解。为了说明本发明，所附图式示出一些，但不是所有的，可替代的具体实施例。然而，应该理解的是，本发明并不限于所示的精确安排和手段。这些图式，其被并入并构成说明书的一部分，有助于解释本发明的原理。

附图说明

图1是本发明的免疫细胞体外活化方法流程图。

图2是依本发明培养PBMC后，针对表达LAG-3的自然杀伤细胞进行数量分析。

图3是依本发明培养PBMC后，针对细胞中LAG3蛋白质的表达量进行分析。