[发明专利]一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于猪流行性腹泻的病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法，属于兽用疫苗技术领域。所述抗原抗体复合物疫苗由体积比为1:5的猪流行性腹泻病毒抗原与猪流行性腹泻病毒抗体充分混合，加入终浓度为1000UI/mL的青霉素和1000ug/mL的链霉素，温度37℃条件下孵育2h获得。本发明抗原抗体复合物疫苗无需对抗原进行灭活，可使其中的活病毒得到有效保护，从而诱导免疫器官产生更多的免疫生发中心。复合物疫苗中抗体起着延缓病毒释放的作用，其中抗体的Fc片段使复合物更易被抗原提呈细胞捕获，从而引起免疫应答。本发明的病毒抗原抗体复合物疫苗既能突破母源抗体又能诱导高效价抗体，对哺乳仔猪、后备猪、母猪及其后代仔猪均具有良好的免疫效果和攻毒保护率。

技术领域

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法。

技术背景

猪流行性腹泻病毒 ( porcine epidemic diarrhea virus，PEDV) 是一种能够引起猪的急性肠道传染病。感染猪主要症状为剧烈腹泻、呕吐和脱水；该病毒只感染猪，各种年龄和品种的猪均易感。PEDV的感染方式主要是通过被感染猪的粪便等经由消化道感染，其中受到的危害最严重的是哺乳仔猪，其发病死亡率高达80～100%，该病毒感染是导致仔猪早期死亡的主要疫病之一。我国最早在1976年首次报道该病的出现，在2010以后在我国多个省份爆发PEDV的感染，给我国的生猪养殖产业造成了巨大的经济损失。

目前生产上对于PEDV的防控，主要是采用传统疫苗，包括组织灭活苗、细胞灭活苗及弱毒疫苗，这些疫苗在PEDV的防治中起着重要的作用，传统疫苗均是免疫母猪从而使哺乳期仔猪获得先天免疫或通过采食初乳获得被动性免疫，但由于疫苗接种不当或母猪的健康状况不良等因素致使疫苗接种后的母猪不能产生足够的保护性抗体，无法给仔猪提供足以抵御病毒感染的免疫力，并且由于仔猪在整个哺乳期均面临PEDV感染的风险，而随着母源抗体的消失和开食后母乳摄入的减少，形成了仔猪免疫的空白期，增加了PEDV感染的风险。

抗原抗体复合物疫苗又称免疫复合物疫苗，是20世纪90年代发展起来的一种新型疫苗，由特异性高免血清按照恰当的比例与抗原混合而成，其优点包括可以突破母源抗体干扰,产生主动免疫，抗原抗体复合物疫苗中的抗体主要作用是延缓病毒的释放。病毒与抗体形成复合物以后, 由于抗体分子的 Fc片段与抗原提呈细胞（APC）的Fc受体有很高的亲合性, 因而使得与抗体结合的病毒更易更有效地与 APC结合，从而激活B 淋巴细胞和 T淋巴细胞,刺激B 淋巴细胞成为抗体分泌细胞，诱导机体产生强烈的体液免疫和细胞免疫。并且在与其他疫苗同时接种时，不影响其他疫苗的免疫效果。基于以上优点近年来在动物疫病防控中的作用越来越受到关注。

发明内容

为了解决传统疫苗不适用于仔猪免疫从而造成仔猪在哺乳期的免疫保护不足，感染PEDV的风险增加的问题，本发明提供一种猪流行性腹泻病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法。

一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗，由体积比为1:5的猪流行性腹泻病毒抗原与猪流行性腹泻病毒抗体充分混合，加入终浓度为1000UI/mL的青霉素和终浓度为1000ug/mL的链霉素，温度37℃条件下孵育2h制得；

所述猪流行性腹泻病毒抗原是将猪流行性腹泻临床病料的毒株接种vero细胞培养，传代至40～45代，所得到细胞半数感染量（TCID₅₀）为10^-5/mL～10^-6/mL的猪流行性腹泻病毒即为病毒抗原液；

所述猪流行性腹泻病毒抗体是将配制的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗通过对实验猪的加强免疫，获得实验猪的血清抗体，抗体效价不低于1:128的血清抗体即为病毒抗体；

所述猪流行性腹泻临床病料的毒株已于2019年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心保存，地址：中国 武汉 武汉大学， 保藏编号为CCTCC NO:V201915。