[发明专利]一种高通量集成化磷酸化蛋白组学检测方法

权利要求书

1.一种磷酸化酪氨酸蛋白质复合物的样品前处理方法，其特征在于，所述样品前处理方法包括：

(1)将包含SH2结构域的探针通过生物素固定在链霉亲和素细胞培养板上，保存于保存试剂中；

(2)加入样本孵育，并对孵育产物进行光辐射；

(3)对光辐射产物进行还原烷基化后，加入酶解试剂，进行样品前处理；

所述探针由间隔臂和连接于所述间隔臂上的SH2结构域、光反应基团和生物素形成；

所述酶解试剂为含有胰蛋白酶的碳酸氢铵溶液。

2.根据权利要求1所述的样品前处理方法，其特征在于，所述胰蛋白酶在所述碳酸氢铵溶液中的浓度为0.0005～0.003μg/μL，优选为0.002μg/μL。

3.根据权利要求1或2所述的样品前处理方法，其特征在于，所述碳酸氢铵溶液的浓度为30～60mM，优选为50mM。

4.根据权利要求1-3任一项所述的样品前处理方法，其特征在于，所述胰蛋白酶与所述样本的质量比为1:(300～500)，优选为1:500。

5.根据权利要求1-4任一项所述的样品前处理方法，其特征在于，所述包含SH2结构域的探针的保存试剂为含有NaN₃的NP-40缓冲液；

优选地，所述NaN₃在所述NP-40缓冲液中的质量体积百分比为0.02～0.05％。

6.根据权利要求1-5任一项所述的样品前处理方法，其特征在于，所述保存的温度为0～4℃。

7.一种磷酸化酪氨酸蛋白质复合物的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括对权利要求1-6任一项所述的样品前处理方法制备的样本进行色谱分离和质谱分析的步骤。

8.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于，所述色谱分离中色谱柱的内径为75～150μm，优选为150μm；

所述色谱柱为C18色谱柱；

优选地，所述色谱分离的流动相为0.1～1％甲酸溶液和含0.1～1％甲酸的乙腈；

优选地，所述流动相的流速为600～1000nL/min，优选为800nL/min；

优选地，所述色谱梯度为20min有效分离梯度。

9.根据权利要求7或8所述的分析方法，其特征在于，所述质谱采用非依赖性数据采集模式进行；

优选地，所述质谱采用Q Extractive HF-X质谱仪；

优选地，所述非依赖性数据采集模式的扫描范围为350～1550m/z；

优选地，所述扫描范围包括40个窗口数量的可变窗口；

优选地，在40个可变窗口中，含有1～3个MS1采集窗口，优选为含有3个MS1采集窗口。

10.一种权利要求1-6任一项所述的样品前处理方法和/或权利要求7-9任一项所述的分析方法在鉴定磷酸化蛋白复合物中的应用。