[发明专利]一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法

说明书

本发明提供一种使用亚临界技术提取和分离灵芝三萜提取物的方法：将灵芝经过亚临界水提取技术，采用不同压力和温度条件，依次将灵芝中的活性成分：灵芝三萜酸性部位和灵芝三萜中性部位从灵芝子实体中提取并分离出来。本发明利用亚临界水提取技术高效和经济的得到灵芝中的不同活性提取物。所得活性提取物中灵芝三萜酸性部位DPPH清除率的抗氧化活性可达到88.38%，灵芝三萜中性部位对人的大细胞肺癌细胞H460的半抑制率IC₅₀为95.0μg/ml，对人肝癌细胞HepG2的半抑制率IC₅₀为77.7μg/ml。

技术领域

本发明属于天然产物提取和食药用菌领域，涉及灵芝的加工利用技术领域，具体涉及一种亚临界水提取和分离灵芝三萜类活性提取物的方法

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.)为多孔菌科真菌灵芝中的一种(中国药典2015版一部)，味甘性平，扶正固本，主要活性成分为灵芝多糖和灵芝三萜，灵芝三萜具有抗氧化，增强免疫力，抗肿瘤，保肝等多种药理功效。灵芝三萜分为酸性部位和中性部位，其中酸性部位包含已有大量文献报道的灵芝酸A等五环三萜酸物质。中性部位包含目前较少研究的灵芝酮三醇等甾醇类物质。

目前对于灵芝(灵芝三萜)的加工利用仅限于乙醇提取等传统提取方法，方法简单，较为安全，但是传统提取方法耗时较长，提取效率低，成本较高，一般提取率为5～6％，灵芝三萜含量15～20％(以熊果酸或齐墩果酸计)，也未有报道检测其中灵芝三萜酸性部位和灵芝三萜中性部位成分含量。

已有报道使用超声、酶解等辅助手段提取灵芝，但都仅限于优化传统提取方法，提取效率提升有限。

亦有报道使用超临界二氧化碳萃取技术提取灵芝中三萜活性成分，但二氧化碳不溶于水，超临界物料需事先干燥脱水，增加成本；超临界二氧化碳萃取技术用于萃取低分子、低极性、亲脂性、低沸点的化合物较为理想，但对萃取极性较强、相对分子质量大的化合物则有一定困难，在实际操作中往往需要加入提携剂来增加化合物的溶解度和选择性，不但增加了操作的繁琐性，也存在着有机溶剂的残留问题。超临界二氧化碳萃取灵芝三萜通常要在50Mpa以上的超高压状态下才能进行，超临界二氧化碳设备价格较高，流体又需要制冷液化，设备制造和运行成本较高。

CN102898539“一种使用亚临界水提取灵芝多糖的方法”使用的提取温度(100～200℃)和压力(1～20Mpa)范围过宽，导致提取产物成分复杂，需经过超滤，除蛋白，醇沉步骤得到灵芝多糖，且提取时间(10～80min)较长。未充分发挥亚临界水提取的高效特性。未说明其得到的灵芝多糖纯度和药理活性。邓辰辰等人(“亚临界水提取灵芝多糖的工艺研究”，邓辰辰等，河南工业大学学报(自然科学版)，2016，37(2)：105～108)虽然对亚临界水提取灵芝多糖的条件进行优化，但仍需经过超滤，除蛋白，醇沉步骤得到灵芝多糖，步骤繁琐，也未说明其得到的灵芝多糖纯度和药理活性。

徐瑞聆等人(“亚临界水提取灵芝子实体中灵芝酸类成分的工艺优化”，徐瑞聆等，华西药学杂志，2019，34(4)：393～395)对亚临界提取灵芝酸类(即灵芝三萜酸性部位)成分进行优化，但其液相检测条件是以灵芝酸A和灵芝酸C2作为对照品，仅仅检测灵芝酸A和灵芝酸C2的总含量，由于它们在灵芝酸的酸性部位的占比过小，不易体现灵芝酸复杂性；由于也未对灵芝三萜中性部位进行检测，就难以真实反映亚临界提取灵芝三萜成分的提取率。同时也未说明其得到的灵芝三萜酸的纯度和药理活性。

发明内容

本发明目的在于克服传统提取和超临界提取灵芝中存在的缺陷，提供一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，能使用水作为提取溶剂从灵芝中高效快速的提取出灵芝三萜的酸性部位和中性部位，从而得到纯度较高的提取物，经药理实验发现其具有良好的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长活性。

本发明所采用的技术方案为一种亚临界水提取和分离灵芝三萜活性提取物的方法，其灵芝活性提取物是由如下步骤制得：