[发明专利]一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法

权利要求书

1.一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)去冷胶血浆

将新鲜冰冻血浆融化，在0-3℃的温度环境下连续离心，去除冷胶，上清即为去冷胶血浆，然后对去冷胶血浆进行过滤，得到澄清的去冷胶血浆；

(2)第一次阴离子交换层析

将过滤后得到的去冷胶血浆进行第一次阴离子交换层析，使含Ⅶ因子的目的蛋白吸附在阴离子凝胶填料柱中，用谷氨酸钠洗脱液将吸附在凝胶填料中的含Ⅶ因子的目的蛋白解吸附,得到含人凝血因子Ⅶ粗品，再用盐洗去除结合在填料上的非目的Ⅶ因子蛋白质,得到洗脱收集液；

(3)洗脱液过滤、调节制品电导率、pH值

将第一次阴离子交换层析得到的含人凝血因子Ⅶ洗脱液的pH值调整为6.50～7.50，电导率值调整为12～17mS/cm，并且进行过滤，过滤后得到第二次阴离子交换层析样品；

(4)第二次离子交换层析

将第二次阴离子交换层析样品进行TMAE凝胶层析，使含Ⅶ因子的蛋白吸附在TMAE凝胶填料柱中，用不同离子强度溶液洗脱下来。

2.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(3)中，过滤时用孔径为0.22um的滤芯进行过滤。

3.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，第一次阴离子交换层析用的交换凝胶为UniGel-80Q。

4.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括第一次阴离子交换层析的层析前准备：用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.15mol/L氯化钠的缓冲液平衡凝胶填料，缓冲液的pH为6.80～7.80，处理后，待上样。

5.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，在层析前，对过滤后的血浆进行处理，调整血浆电导率10～13mS/cm、pH值为7.00～8.00、蛋白质含量为45g/L±5g/L。

6.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，在层析时，将过滤后调节好的去冷胶血浆上样凝胶填料，使目的蛋白质吸附于凝胶填料中，非目的蛋白被流穿而废弃，以线性流速1-3cm/min收集流穿液，再用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.15mol/L氯化钠的缓冲液后平衡凝胶填料5CV。

7.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，用0.3～0.5mol/L谷氨酸钠溶液为洗脱液。

8.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括第二次离子交换层析的层析前准备：用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.15mol/L氯化钠的缓冲液平衡凝胶填料，缓冲液的pH为6.80～7.80，处理后，待上样。

9.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，在层析时，将过滤后调节好的洗脱收集液上样TMAE凝胶填料，使目的蛋白质吸附于TMAE凝胶填料中，非目的蛋白被流穿而废弃，以线性流速1-3cm/min收集流穿液，再用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.15mol/L氯化钠的缓冲液后平衡凝胶填料5CV。

10.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，在层析后，先用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.15mol/L氯化钠的溶液为洗涤液洗涤凝胶填料结合能力较弱的非目的蛋白，弃去洗涤液，再用含0.01mol/L～0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L～0.5mol/L氯化钠的溶液为洗脱液将吸附在凝胶填料中的含Ⅶ因子的目的蛋白解吸附，收集洗脱液。