[发明专利]一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体免疫佐剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体免疫佐剂的制备方法，包括如下步骤：(1)取软脂酸、角鲨烯及乳化剂吐温80和司盘85，水浴加热融化，搅拌均匀得油相；(2)取壳聚糖溶液，水浴加热得水相；(3)在搅拌的条件下，将油相转入水相中，搅拌均匀后使用高剪切仪剪切得到粗分散体；(4)使用超声破碎仪处理粗分散体，转入冷水中剪切得到初乳，再进行冰水浴，固化得产品，记csNLCs。该免疫佐剂具有促进抗原递呈细胞对抗原的摄取、增强机体免疫应答的功能，性能稳定。

技术领域

本发明涉及兽药制剂技术领域，特别涉及一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体免疫佐剂的制备方法。

背景技术

新型疫苗由于免疫原性低而需要免疫佐剂的辅助，以提高免疫应答水平，纳米粒作为免疫佐剂已得到广泛的研究。纳米结构脂质载体(nanostructured lipid carriers，NLCs)作为新一代脂质纳米粒，具有包封率高，稳定性好，可以高效包载抗原物质或免疫刺激物质的优点，能够增强抗原的稳定性，保护抗原不被降解。并且NLCs由固态脂质、液态脂质和表面活性剂构成，制备方法简单，成本低，易制备成冻干粉长期保存。但现有的载体稳定性不高，免疫佐剂的作用还不是太强。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体免疫佐剂的制备方法。

技术方案：本发明提供一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体免疫佐剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)取软脂酸、角鲨烯及乳化剂吐温80和司盘85，水浴加热融化，搅拌均匀得油相；

(2)取壳聚糖溶液，水浴加热得水相；

(3)在搅拌的条件下，将油相转入水相中，搅拌均匀后使用高剪切仪剪切得到粗分散体；

(4)使用超声破碎仪处理粗分散体，转入冷水中剪切得到初乳，再进行冰水浴，固化得产品，记csNLCs。

进一步地，所述软脂酸与角鲨烯的质量比为1～9∶1～9。

进一步地，所述吐温80与司盘85的质量比为0.5～1∶1。

进一步地，所述吐温80和司盘85形成的复合乳化剂与软脂酸和角鲨烯混合形成的混合脂质的比为1∶0.1～0.5。

进一步地，所述壳聚糖溶液，由中粘度壳聚糖溶于冰乙酸溶液中，溶质壳聚糖的质量分数为0.1％～0.5％。

进一步地，所述产品的粒径为235.80±5.991nm，Zeta电位值34.90±6.954mv，多分散系数为0.283±0.015。

上述技术方案中：

角鲨烯(squalene)是不饱和的三萜脂族烃。角鲨烯可募集免疫细胞到注射部位并增强局部细胞因子的产生，从而导致抗原负载的抗原呈递细胞数量增加。其中包含角鲨烯成分的MF59佐剂已经被美国FDA批准上市应用于多种亚单位疫苗，如乙肝疫苗、丙肝疫苗、流感疫苗等。

壳聚糖(chitosan，CS)是自然界中唯一带正电荷的天然多糖。用阳离子涂层修饰纳米颗粒表面可稳定抗原，防止其发生酶促降解和机械降解，纳米粒表面的阳离子化能够促进抗原进入靶细胞。壳聚糖作为缓控释载体的修饰材料，其修饰纳米载体不仅对纳米载体有保护作用，还可以提高纳米载体稳定性，促进活性物质的吸收，增强活性物质的缓释性。

有益效果：本发明的方法简单快捷，成本低，制得的csNLCs外观呈乳白色的乳液，乳液无分层的现象，体系稳定。本发明制备的csNLCs可以作为抗原或其他免疫增强物质的载体，具有促进抗原递呈细胞对抗原的摄取、增强机体免疫应答的功能，充分发挥免疫佐剂的作用，是一种具有潜力的抗原递送系统。

附图说明

图1是实施例2制得的csNLCs粒径分布图；