[发明专利]一种循环肿瘤细胞CTCs的检测鉴定方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞CTCs的检测方法，其特征在于：采用物理方法捕获、形态方法识别、免疫方法验证。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的物理方法捕获为：

a.采集癌症患者外周血，盛于血样容器中；

b. 血样容器的下方连接一带有过滤膜的过滤器，将外周血经过滤器过滤；所述过滤膜上均匀布满直径为10-25微米的滤孔；

c．过滤完成后，进行瑞氏液染色，PBS缓冲液冲洗干净，取下滤膜，收集过滤膜上的循环肿瘤细胞CTCs。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的形态方法识别为：将收集的循环肿瘤细胞CTCs，放置到电子显微镜下，统计循环肿瘤细胞CTCs的数量，测量循环肿瘤细胞CTCs的尺寸，并记录循环肿瘤细胞CTCs的形态，并将其与标准的循环肿瘤细胞CTCs相对比，判断其类别。

4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的免疫方法验证为：将收集的循环肿瘤细胞CTCs加入脱色液中浸泡4-6小时，脱去CTC染色液；室温孵育；滴加100μl DAB显色液，18～26℃孵育并随时在显微镜下观察显色情况，观察时间为3～10min；弃掉DAB显色液，流水冲洗5min，苏木素染色5min；盐酸酒精分化8秒，自来水返蓝5min；返蓝后的CTC采用75%乙醇，95%乙醇，100%乙醇梯度乙醇脱水各10 min，然后加入15 mL试剂A，振荡均匀后过滤；加入试剂B，脱色30 min，干燥，中性树脂封固；光学显微镜下镜检。

5.一种权利要求1所述的检测方法的装置，其特征在于：所述的捕获用的装置有铁架台（1），铁架台（1）的上方固定有血样容器（2），血样容器（2）的下方连接有滤器（3），滤器（3）内固定有滤膜；滤器（3）的下方分别有输液器（4）和废液缸（5）；所述的滤膜均匀布满有向下凹的滤孔，所述的滤孔上孔直径为40-60微米，下孔直径为10-18微米，下凹的深度为10-20微米，上孔与下孔之间呈圆弧状。