[发明专利]一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法

说明书

本发明提出一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法，采用质谱血清代谢组学技术与数理统计方法寻找与药源性急性肾损伤相关的进展性代谢标志物，并采用ROC曲线确证标志物的诊断能力，最终确定反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物。本发明通过机体血清中内源性代谢标志物含量的变化过程，筛选反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物，解决了现有药源性急性肾损伤病变进程评价方法的缺点，最终依据确定的代谢标志物对药源性急性肾损伤病变进程进行评价，具有可量化、快速、灵敏度高、特异性强、无创伤的特点。

技术领域

本发明属于标志物筛选鉴定技术领域，尤其是一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法。

背景技术

药源性急性肾损伤是肾脏对治疗剂量药物的不良反应和因药物过量或不合理应用而出现的毒性反应。药源性急性肾损伤可以达到急性肾损伤的1/4，而且急性肾损伤易导致为慢性肾损伤。因此，早期认识及诊断药源性急性肾损伤，对预防晚期急性肾损伤的发生尤其重要。

顺铂诱导的小鼠肾损伤模型是一种模拟人类肾脏疾病的动物模型，其临床表现接近药源性急性肾损伤的特征。实验中可依据24h尿蛋白定量判断药源性急性肾损伤模型复制成功与否，而肾病的病理类型及病变程度主要依据肾组织病理学检查，不仅主观性强且耗时耗力，目前尚无药源性急性肾损伤进程动态评价方法，因而需要建立一种整体非入侵、快速、高灵敏度、专属性好的可用于急性肾病诊断以及动态反映疾病病程的方法。

代谢组学以其不断增加的覆盖范围及其内在的高通量能力在许多领域中得到应用，如疾病诊断和治疗，药物毒性研究，生物标志物发现以及疾病机制探索等。血清中含有原型药物成分及其代谢产物，在反映肾脏状态方面具有很大优势。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法，通过质谱血清代谢组学技术与数理统计方法寻找与药源性急性肾损伤相关的潜在进展性代谢标志物，并采用ROC曲线确证标志物的诊断能力，最终确定反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物，具有可量化、快速、灵敏度高、特异性强、无创伤的特点。

实现本发明目的的技术解决方案为：

一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法，包括以下步骤：

步骤1：采用腹腔注射20mg/kg顺铂进行诱导，建立药源性急性肾损伤小鼠模型；采用腹腔注射20mg/kg生理盐水，建立空白对照组小鼠；

步骤2：收集空白对照组小鼠血清；在建立小鼠模型后的第6h、12h、24h、48h、72h、168h分别收集小鼠模型的血清，形成6h小鼠模型血清、12h小鼠模型血清、24h小鼠模型血清、48h小鼠模型血清、72h小鼠模型血清、168h小鼠模型血清，再分别对空白对照组小鼠血清和小鼠模型血清进行液质联用分析，得到小鼠模型的代谢物液相指纹图谱；

步骤3：使用XCMS软件对小鼠模型的代谢物液相指纹图谱进行峰提取、峰识别、峰匹配、峰对齐及归一化等数据预处理，得到包含保留时间Rt、质荷比m/z和峰高的代谢轮廓数据，再将代谢轮廓数据导入SIMCA-P软件进行处理得到差异代谢物；

步骤4：计算各差异代谢物的变化率，结合单因素方差分析、随机森林算法、Pearson相关系数筛选以及代谢物的定性分析，确定药源性急性肾损伤病变进程的进展性代谢标志物；

步骤5：依据ROC曲线下与坐标轴围成的面积AUC来评估进展性代谢标志物的诊断准确性：将AUC＞0.7的进展性代谢标志物作为反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物。