[发明专利]一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法

权利要求书

1.一种药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：采用腹腔注射20mg/kg顺铂进行诱导，建立药源性急性肾损伤小鼠模型；采用腹腔注射20mg/kg生理盐水，建立空白对照组小鼠；

步骤2：收集空白对照组小鼠血清；在建立小鼠模型后的第6h、12h、24h、48h、72h、168h分别收集小鼠模型的血清，形成6h小鼠模型血清、12h小鼠模型血清、24h小鼠模型血清、48h小鼠模型血清、72h小鼠模型血清、168h小鼠模型血清，再分别对空白对照组小鼠血清和小鼠模型血清进行液质联用分析，得到小鼠模型的代谢物液相指纹图谱；其中，液质联用分析的条件为：

色谱条件： Waters ACQUITY UHPLCTM BEH C18色谱柱，流动相A为含0.1%甲酸的水，流动相B为乙腈，体积流量0.3 μL/min；UV检测波长254nm；柱温30℃；进样量3 μL；洗脱梯度为：0 - 2min，2% B；2 - 3min，2 - 35% B；3 - 17min，35 - 70% B；17 - 18min，70% B；18- 29min，70 - 98% B；29 - 31min，98% B；31 - 33min，98 - 2% B；33 - 35min，2% B；

质谱条件：采用HESI离子化方式，喷雾电压正极3.5kV、负极2.5kV，碰撞能量为12.5、25、37.5eV；加热器温度300℃，毛细管温度320℃，辅助气体积流量10arb，鞘气体积流量35arb；采集模式为正负离子切换，扫描模式采用Full Scan/dd-MS2，采集范围为m/z 100～1500；分辨率采用 MS Full Scan 35000 FWHM，MS/MS 17500 FWHM；

步骤3：使用XCMS软件对小鼠模型的代谢物液相指纹图谱进行峰提取、峰识别、峰匹配、峰对齐及归一化数据预处理，得到包含保留时间Rt、质荷比m/z和峰高的代谢轮廓数据，再将代谢轮廓数据导入SIMCA-P软件进行处理得到差异代谢物；其中，寻找差异代谢物的步骤具体包括：在正负离子模式下，对空白对照组小鼠血清和小鼠模型血清的代谢轮廓数据进行无监督模式识别的主成分分析，再采用有监督的偏最小二乘法判别分析与正交偏最小二乘法判别分析确定空白对照组代谢物轮廓与小鼠模型代谢轮廓存在显著差异，最后结合正交偏最小二乘法判别分析中VIP值＞1、S-plot中P value值＞0.58以及独立样本t-test检验P＜0.05，得到具有显著性的差异代谢物；

步骤4：计算各差异代谢物的变化率，结合单因素方差分析、随机森林算法、Pearson相关系数筛选以及代谢物的定性分析，确定药源性急性肾损伤病变进程的进展性代谢标志物；具体步骤包括：

步骤4-1：对步骤3得到的差异代谢物采用单因素方差分析进行初筛，通过显著差性异比较，以p0.05作为判别条件，去除不满足条件的差异值，获得潜在代谢标志物；

步骤4-2：对步骤4-1得到的潜在差异代谢物采用随机森林算法进行筛选，以MeanDecrease Accuracy0.001作为判别条件，获得潜在进展性代谢标志物；

步骤4-3：对步骤4-2得到的潜在进展性代谢标志物采用Pearson相关性分析，以R²0.7作为判别条件，获得时间依赖型潜在进展性代谢标志物，所述时间依赖型潜在进展性代谢标志物在整个周期中变化趋势一致；

步骤4-4：对步骤4-3得到的时间依赖型潜在进展性代谢标志物，通过使用 HMDB 数据库与相关文献并结合二级碎片离子进行定性分析，排除假阳性结果即数据库中无法查到且两次保留时间大于允许偏差0.2min，将最终筛选到的代谢物确定为进展性代谢标志物；

步骤5：依据ROC曲线下与坐标轴围成的面积AUC来评估进展性代谢标志物的诊断准确性：将AUC＞0.7的进展性代谢标志物作为反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物，所述反映药源性急性肾损伤病变进程的代谢标志物包括Toxopyrimidine、Phthalic acid、Atagabalin、2-Methyl-4,6-dinitrophenol、Myristyl sulfate、Taurine、Benactyzine、Fasoracetam、Eicosapentaenoic acid、Trepibutone、9-Decenoylcarnitine、Xanthohumol、3',4'-methylenedioxy-alpha-pyrrolidinobutiophenone。

2.一种采用权利要求1的筛选方法获取的药源性急性肾损伤病变进程代谢标志物在制备药源性急性肾损伤病变进程诊断鉴别试剂中的应用。