[发明专利]一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法

权利要求书

1.一种妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：包括有以下步骤：

(1)对照品溶液的配制线性关系：

精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.10-1.40mg/mL、绿原酸0.30-0.55mg/mL、龙胆苦苷0.45-0.60mg/mL、橙皮苷0.45-0.65mg/mL、黄芩苷1.00-1.25mg/mL、丹酚酸B0.95-1.25mg/mL、汉黄芩苷0.25-0.50mg/mL、黄芩素0.65-0.85mg/mL、汉黄芩素0.40-0.65mg/mL、洋川芎内酯A2.50-4.50mg/mL和Z-藁本内酯1.85-2.10mg/mL的对照品溶液，即得；

精密吸取各个对照品溶液适量至10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，即得混合对照品溶液，吸取适量混合对照品溶液，分别置相应的容量瓶中，加入甲醇定容，分别稀释不同倍数，得到7个不同浓度水平的混合对照品溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤；根据下述色谱条件测定峰面积，以各对照品的进样浓度X，μg/mL为横坐标，以相应的化合物峰面积Y为纵坐标，进行线性回归；

(2)供试品溶液的制备：

取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入45-55％甲醇15-30mL，称重，加热回流方式提取30-90min，提取1次，放冷，再称重，用45-55％甲醇补足减少的量，并混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；

(3)色谱条件：

色谱柱：COSMOSIL C₁₈3.0mm×150mm，2.6μm；流动相：乙腈(A)-0.4％乙酸(36％)水溶液(B)梯度洗脱，流速为0.3-0.5mL/min；柱温为25℃；检测波长为280nm；进样量为4μL；

(4)指纹图谱的建立：

按上述提供的方法制备供试品溶液和对照品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图得到妇科再造丸的HPLC指纹图谱和混合对照品溶液的HPLC图；

(5)指纹图谱的确认：

按供试品溶液制备方法制备多批妇科再造丸供试品溶液，按上述色谱条件进行测定；通过分析比较确定了35个共有峰，这些共有峰构成妇科再造丸的指纹图谱，并在指纹图谱中指认15个成分；

(6)多指标成分定量：

按照上述供试品溶液的制备方法制备取妇科再造丸成品12批，按上述色谱条件检测，每个样品平行测得两次，记录的峰面积，根据标准曲线计算其含量，分别计算12批样品中的11个化合物平均含量，比较各成分在样品中的含量百分比。

2.根据权利要求1所述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：所述步骤(1)中，对照品溶液是这样配制：精密称取各对照品适量，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸1.270mg/mL、绿原酸0.410mg/mL、龙胆苦苷0.502mg/mL、橙皮苷0.5600mg/mL、黄芩苷1.1133mg/mL、丹酚酸B1.055mg/mL、汉黄芩苷0.383mg/mL、黄芩素0.770mg/mL、汉黄芩素0.5133mg/mL、洋川芎内酯A 3.573mg/mL、Z-藁本内酯1.998mg/mL的对照品溶液，即得。

3.根据权利要求1所述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中，供试品溶液是这样配制：取妇科再造丸适量，研细，精密称取约3g，置50mL锥形瓶中，精密加入20mL 50％甲醇，称重，加热回流方式提取60min，提取1次，放冷，再称重，用50％甲醇补足减少的量，并混合均匀，进样前用0.22μm微孔滤膜过滤后，取续滤液供HPLC检测分析。

4.根据权利要求1所述的妇科再造丸HPLC指纹图谱及多指标定量的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)中，梯度洗脱条件为：0-12.5min，A相2％-16％，12.5-19min，A相16％，24-30min，A相22％-30％，30-33min，A相30％-32％，33-36min，A相32％-50％，36-47min，A相50％-60％，47-49.5min，A相60％-83％，49.5-52min，A相83％-95％，52-55min，A相95％。