[发明专利]一种寨卡病毒E蛋白结合疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种寨卡病毒E蛋白结合疫苗及其制备方法，具体步骤：1)将β‑葡聚糖的邻位羟基氧化为醛基，得到氧化β‑葡聚糖；2)加入连接桥化合物，与氧化β‑葡聚糖中的醛基反应，得到含连接桥的β‑葡聚糖；3)寨卡病毒E蛋白与含连接桥的β‑葡聚糖进行反应，纯化得到寨卡病毒E蛋白结合疫苗。该疫苗能诱导产生高水平的细胞免疫应答和体液免疫应答。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及一种基于β-葡聚糖修饰的寨卡病毒重组蛋白结合疫苗。

背景技术

寨卡病毒是一种具有二十面体结构和囊膜的RNA病毒，属于黄病毒属病毒。寨卡病毒经伊蚊传播，能够感染神经细胞，并突破血胎、血眼、血睾和血脑屏障，导致新生儿小头症和成年人格林巴利综合症。近几年来，在中南美洲乃至世界范围内爆发的寨卡疫情出现了不同寻常的严重临床表现。由于我国与寨卡病毒流行地区有着密切的人员往来，寨卡病毒输入性病例的持续发生对我国的公共卫生安全构成了严重的威胁。在全球范围内，目前尚无有效的手段对寨卡病毒病进行防治。即使通过扑灭蚊虫来预防寨卡病毒的感染，在实施过程中也存在着极大的难度，尤其在蚊虫密度高的夏季，根本无法完全防范蚊虫的叮咬。疫苗接种对于传染病的预防和控制起着重要的作用。因此，接种疫苗是预防寨卡病毒病最为经济有效的方法，可以有效遏制寨卡病毒病的传播与流行。

目前在研的寨卡病毒疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、腺病毒载体疫苗、嵌合病毒疫苗、重组蛋白疫苗和合成肽疫苗等。减毒活疫苗和灭活疫苗已取得了一些阶段性研究进展。然而，这两类疫苗存在着安全性低、特异性差和成分不明确等问题。例如，寨卡病毒减毒活疫苗存在毒力回复的可能性。DNA疫苗和腺病毒载体疫苗能为灵长类动物提供较好的免疫保护，而且毒副作用小。然而，DNA疫苗进入机体后易被降解，同时还存在被整合到宿主基因组的风险；质粒上的抗生素基因可能会导致宿主细胞出现耐药性，给细菌病的防治带来困难。腺病毒载体本身具有较强的免疫原性，而且靶向性差，限制了腺病毒载体疫苗的临床应用。

基因工程技术的迅速发展促进了重组蛋白疫苗的研发。重组蛋白疫苗因其具有安全性高、成分明确、特异性强和易于制备等优点，已成为疫苗研发的热点之一。E蛋白和prM蛋白是两种主要的寨卡病毒囊膜蛋白，也是寨卡病毒疫苗研发的重要靶点抗原。其中，E蛋白构成病毒颗粒表面的突起，在病毒的吸附、内吞、膜融合和出胞过程中发挥着关键作用。尽管E蛋白是一种理想的寨卡病毒抗原，但其免疫原性弱，激发的抗体和细胞免疫应答不强，不能提供有效且持续的免疫保护。

疫苗佐剂能够非特异性地增强抗原的免疫原性或改变免疫反应类型。铝佐剂是一种目前使用最广泛的疫苗佐剂，能显著增强机体的体液免疫应答。然而，铝佐剂不能刺激机体产生较强的细胞免疫应答，而且易导致接种部位产生病理反应。此外，MF59、AS03、Virosome和AS04等疫苗佐剂也被批准使用，但这些疫苗佐剂都存在一定的毒副作用。多糖佐剂因其来源天然、可生物降解、生物安全性好等优点，在近年来的疫苗佐剂研究中越来越受到重视和青睐。其中，β-葡聚糖是真菌细胞壁的一种主要组成部分，具有免疫调节和免疫增强作用。β-葡聚糖是葡萄糖以β-(1→3)糖苷键形成的多糖，能识别巨噬细胞表面的多糖受体(如CR3和Dectin-1)，激活免疫细胞(如巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞和中性粒白细胞)，促进细胞因子(如γ-干扰素、IL-2、IL-5和IL-10)的分泌，并提高机体的免疫应答水平。

抗原递送系统可将疫苗佐剂与抗原递送到机体的免疫细胞(如抗原提呈细胞)，从而提高抗原的免疫原性。例如，纳米颗粒通过装载抗原和佐剂形成纳米颗粒疫苗，在小鼠体内表现出很强的免疫应答反应。然而，纳米颗粒材料(如碳纳米管和金纳米颗粒)的水溶性差、不易降解、具有长期毒性，而且不易规模化生产，这些缺点限制了纳米颗粒疫苗的临床应用。共价结合使疫苗佐剂与抗原结合形成抗原递送系统，能将两者同时递送到免疫细胞，并由免疫细胞识别、摄取和提呈，从而刺激机体产生强烈的免疫应答反应。基于佐剂共价结合的重组蛋白疫苗(即重组蛋白结合疫苗)具有水溶性好、易降解、毒性低和易于规模化生产的特点。通过选择合适的抗原、疫苗佐剂和共价结合方法，可望开发出高效的寨卡病毒重组蛋白结合疫苗。

发明内容