[发明专利]一种贴壁细胞核蛋白的分离方法

权利要求书

1.一种贴壁细胞核蛋白的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)待细胞培养贴壁铺展至面积占培养皿底面积70-90％时吸弃培养液，用预冷的PBS清洗贴壁细胞3遍；

2)每10⁷个细胞加入500μL预冷的A液，A液为用PBS配制的0.1％-2％表面活性剂溶液，处理之前每1mL A液加18μL PMSF、1μL蛋白质酶抑制剂、1μL磷酸蛋白酶抑制剂，冰上处理10min；

3)吸弃A液，用预冷的A液再轻轻清洗细胞核3遍；

4)采用悬液状态下破碎细胞核：用预冷A液温和清洗和摇晃培养皿，收集细胞核于预冷离心管中；低温低速离心10min，弃去上清；向沉淀中加入100μL预冷的B液，以涡旋震荡仪剧烈震荡20秒，震荡3次，B液为用PBS配制的0.1％-2％去污剂溶液，处理之前每1mL B液加18μL PMSF、1μL蛋白质酶抑制剂、1μL磷酸蛋白酶抑制剂；

或者，采用贴壁状态下破碎细胞核：瓶中加入1mL预冷的B液，处理之前每1mL B液加18μL PMSF、1μL蛋白质酶抑制剂、1μL磷酸蛋白酶抑制剂，在冰上反复吹打，收集上清；

5)低温高速离心20min，立即收集上清，即为核蛋白，置于-80℃冰箱保存。

2.根据权利要求1所述的一种贴壁细胞核蛋白的分离方法，其特征在于，当采用贴壁状态下破碎细胞核时，浓缩收集核蛋白的溶液。

3.根据权利要求1所述的一种贴壁细胞核蛋白的分离方法，其特征在于，所述的表面活性剂为NP-40、TritonX-100或Tween20。

4.根据权利要求1所述的一种贴壁细胞核蛋白的分离方法，其特征在于，所述的去污剂为SDS、EDTA。